hsa-miR-3658通过LASS2调控膀胱癌演进和化疗敏感性的机理探讨

Bladder cancer is one of the most common cancers and microRNAs have been identified as key molecules in regulatory networks, and they involve in tumor cell proliferation, differentiation, metastasis, apoptosis and cycle regulation. The expression of Homo sapiens LAG1 longevity assurance 2 (LASS2) was significantly correlated with tumor stage, cell proliferation, metastasis and invasion. In our previous study, we found that the most relevant LASS2-related microRNAs was hsa-miR-3658 by using the methods of gene chip and bioinformatics technique. The roles of the screened hsa-miR-3658, including post-transcriptional regulation, cell proliferation ability, invasion, metastasis, apoptosis, epithelial-mesenchymal transition and chemosensitivity of bladder cancer cells， will be explicit. This study was designed to study the anticancer effect of hsa-miR-3658 and LASS2 to evaluate its latent energy in prevention and clinical application of human bladder cancer.

膀胱癌是我国最常见的泌尿系统肿瘤，而microRNA发挥基因表达调控，参与肿瘤细胞增殖、分化、转移、凋亡、周期调控等生物学过程已得到广泛证实。我们前期研究发现具有抑制肿瘤演进的LASS2基因在不同分期、分级和预后的膀胱癌组织以及不同侵袭潜能的膀胱癌细胞株中存在表达差异，进而运用芯片和生物信息学技术筛选并验证与LASS2基因存在相互作用的最相关的microRNA为hsa-miR-3658。本研究将进一步明确筛选出的hsa-miR-3658对LASS2基因转录后调控翻译表达的影响,对膀胱癌生物学行为的影响；明确hsa-miR-3658对膀胱癌化疗敏感性的影响；发掘与LASS2存在相互作用hsa-miR-3658在预防和治疗膀胱癌中的作用，评估hsa-miR-3658及其靶基因LASS2应用于临床基因治疗的安全性、可行性和有效性，了解其开发的应用价值，为膀胱癌发生发展机制研究提供新的实验依据。

背景：膀胱癌是我国最常见的泌尿系统肿瘤，我们前期研究发现具有抑制肿瘤演进的 LASS2 基因在不同分期、分级和预后的膀胱癌组织中存在表达差异，进而运用芯片和生物信息学技术筛选并验证与 LASS2 基因存在相互作用的最相关的 microRNA 为 hsa-miR-3658。.方向：本项目主要研究has-miRNA-3658的表达对人膀胱癌细胞增殖、黏附、侵袭、迁移、凋亡、化疗敏感性、上皮-间叶转变（EMT）能力等生物学行为的影响，并探究其与LASS2基因表达以及膀胱癌预后的相关性。.主要内容：我们通过细胞转染、MTT实验、侵袭小室实验、细胞划痕实验、抗肿瘤药物处理等以及RT-PCR、western blot等实验，研究has-miRNA-3658对膀胱癌细胞的影响及其作用机理；并通过RT-PCR检测膀胱癌患者的肿瘤组织和癌旁组织中has-miRNA-3658表达水平，以及其与膀胱癌患者临床特征的相关性，评估has-miRNA-3658及其靶基因LASS2对于膀胱癌患者预后评估的价值；最后，我们在裸鼠原位和异位移植瘤模型内验证了LASS2以及下游信号通路的表达情况。.重要结果和关键数据：我们发现膀胱癌组织中has-miRNA-3658与LASS2的表达负相关，has-miRNA-3658 mimics可在mRNA水平抑制LASS2表达，并且通过抑制LASS2促进细胞增殖、侵袭和转移，抑制细胞凋亡，调控膀胱癌细胞EMT并降低细胞对化疗药物敏感性。此外，转染hsa-miR-3658 mimics促进ATP6L、MMP9、ERK2、MMP2、ERK1和Survivin等分子的表达。has-miR-3658在膀胱癌组织中表达高于癌旁组织，并且has-miRNA-3658与LASS2的表达负相关，has-miR-3658高表达与肿瘤复发（t=7.172, p<0.001）、淋巴结转移（t=11.739, p<0.001）、远处转移（t=6.497, p<0.001）、肿瘤分级（t=22.021, p<0.001）和TMN分期（t=5.722, p<0.001）显著相关。.科学意义：通过上述实验，我们发现has-miRNA-3658通过调控LASS2的表达影响膀胱癌细胞的生物学行为，对膀胱癌患者的预后评估有一定价值，为后续的实验奠定了基础。.