黄胸鼠抗性检测方法及凝血酶反应抗性机理研究

重点研究BCR法和抗性基因检测法，探讨抗凝血杀鼠剂对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的影响，以及引起抗性鼠产生的关键凝血因子。通过BCR法，建立黄胸鼠PCA标准曲线和ED数据，明确其判断产生反应与否的凝血时间和抗性鉴别剂量，并通过LFP抗性检测，评价BCR法的可靠性，并改进优化其BCR法；利用BCR、LD、FLP法，建全黄胸鼠ED、LD、FLP系列基本数据；通过ARMS-PCR法检测抗性黄胸鼠VKORC1基因，研究其抗性突变体情况。.研究结果将较好地解决黄胸鼠BCR法抗性检测方法与标准问题，建立起抗性基因检测方法，明确黄胸鼠VKORC1基因的抗性突变体，为抗药性检测方法的建立与完善工作提供基础；阐明凝血因子的变化情况，明确其变化在敏/抗性鼠中的差异，为抗性机制研究提供基础；通过ED、LD、FLP系列基本数据，能明确当前黄胸鼠对抗凝血类杀鼠剂的敏感性程度，为抗凝血杀鼠剂及其抗药性管理工作提供依据。

开展抗性方法研究、加强抗性检测与抗性管理紧迫性日益严峻，是目前在鼠害控制以及抗性管理中非常重要和关键的一个环节，它能提供非常重要和基础的数据，为目前鼠害控制中面临的问题（如抗性问题、杀鼠剂品种替换有限问题、以及鼠种群对抗凝血剂的敏感与抗性的分布信息的缺乏等）的解决提供支持。因此，项目以黄胸鼠为研究对象，通过BCR法、LD法和LFP法，建立PCA标准曲线，开展ED、LD和LFP系列数据测试，通过凝血因子测试，研究抗性机制。具体结论如下：.在毒力测定中，明确杀鼠灵、溴敌隆对敏感黄胸鼠的LD系列数据和0.05%杀鼠灵、0.005%溴敌隆毒饵对敏感黄胸鼠的LFP系列数据，指出0.05%杀鼠灵毒饵LFP98标准的摄食期存活标准雌鼠9d、雄鼠8d； LFP99性检测标准是：雌雄鼠均为9d；指出0.005%溴敌隆毒饵LFP98标准雌雄鼠均为6d； LFP99性检测标准雌鼠7d、雄鼠8d。.在BCR研究中，建立了敏感黄胸鼠PCA标准曲线的最适模型为S形曲线，并指出17%PCA的 PT值INR为2.54；10%PCA 的PT值INR为5.31。在相同检测条件下，该值可用于黄胸鼠对抗凝血类杀鼠剂产生反应与否的判断值。在ED-反应中，分别获取了杀鼠灵、溴敌隆对敏感黄胸鼠的ED系列数据。.在凝固时间研究中发现，在杀鼠灵低剂量（小于3.2mg•kg-1）刺激条件下，PT延长在24h即达到最高，随后逐渐缩短，并逐渐恢复到正常水平。而APTT延长在48h即达到最高，随后逐渐缩短，并逐渐恢复到正常水平。在杀鼠灵高剂量（3.2-4.5mg•kg-1）刺激条件下，PT、APTT延长的趋势是：随着剂量的偏高PT、APTT延长一直持续，并不能恢复，血液不能凝固，直至鼠死亡。.在凝血因子研究发现，敏感鼠经杀鼠灵ED99剂量处理后，发现其因子活动度总体变化趋势是：各因子活动度均明显快速降低，其中，Ⅶ因子活动度降低最快、降幅最大，在24h左右降到最低。其次是Ⅹ因子，在48h左右降到最低。最后是Ⅱ、Ⅸ因子，在72h左右降到最低。这表明，药物对Ⅶ因子影响最大，其次是Ⅹ因子。与敏感鼠相比，耐药性鼠Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ、Ⅸ因子活动度的降速慢，其中，Ⅱ、Ⅹ因子活动度变化甚微，Ⅶ因子变化最快、最大，并在24h左右降到最低；其次是Ⅸ因子，在72h左右降到最低。Ⅶ因子对Ⅸ因子活动度的降低起着重要影响，而药物对Ⅸ因子的直接影响最小。