基于NADPH氧化酶活性调控的益心解毒方治疗心力衰竭的机制研究

活性氧（ROS）在心力衰竭的发生和进展中起着关键作用，而Nox2、Nox4型NADPH氧化酶是其最主要的来源。干预和抑制Nox2、Nox4型NADPH氧化酶，已成为心衰药物研发的新热点，但目前仍缺乏可用于临床的药物。益心解毒方针对心力衰竭的核心病机立法，具有益气温阳、活血解毒功效。前期的临床研究和动物实验均表明，该方在改善心功能、减缓心室重构等方面药效显著，而抑制NADPH氧化酶活性、降低心肌ROS水平可能是其发挥药效的重要机制。本研究围绕益心解毒方对Nox2、Nox4型NADPH氧化酶不同调控环节的影响展开，在心梗后心衰大鼠和原代培养的心肌细胞提示益心解毒方可能的干预环节的基础上，采用H9c2细胞构建Nox2、Nox4的过表达、RNAi及报告基因等细胞模型，进一步探讨该方对其转录、翻译及活化的影响，阐明其降低NADPH氧化酶活性的调控环节与机制。为心力衰竭的治疗提供一种新的思路与方法。

本项目围绕益心解毒方（YXJD）对NOX2、NOX4型NADPH氧化酶不同调控环节的可能作用展开研究，圆满完成了研究计划与任务。发表论文5篇，其中SCI 1篇；已录用3篇。培养研究生3名。.【主要研究结果】.1）YXJD可显著降低心梗后心功能不全大鼠心肌组织NOX2、NOX4表达水平（P<0.05）；.2）显著降低心肌缺血心功能不全小型猪心肌组织NOX4的mRNA表达水平（P<0.05）;.3）与AngII造模组相比，低剂量组H9C2心肌细胞ROS、NOX2/NOX4的mRNA和蛋白质表达水平均显著降低（P＜0.05）；药物组P47、P22、AT1的蛋白表达水平显著降低；低剂量组STAT3、MMP3、MMP9表达水平显著降低。.4）成功构建了NOX2、NOX4亚基过表达的质粒及H9C2细胞模型。中、低剂量组可显著降低NOX2过表达H9C2细胞的NADPH氧化酶活性（P＜0.01）；对NOX4过表达细胞，仅中剂量组具有显著的抑制作用（P＜0.05）。.5）成功构建了NOX2、NOX4亚基的RNAi质粒及H9C2细胞模型。NOX2或NOX4亚基RNA沉默可逆转YXJD对NADPH氧化酶活性的抑制作用。.6）网络药理学预测初步发现了甘草次酸等类药性成分和PPARr、iNOS等候选靶点。.【讨论与结论】.益心解毒方主要作用于NOX2和NOX4型NADPH氧化酶，可能的作用环节包括：.1）作用于转录水平，降低NOX2/NOX4亚基mRNA和蛋白质表达水平；.2）通过降低AT1受体含量，抑制AngII诱导的NOX2/NOX4表达水平增加；.3）降低跨膜亚基P22和活化亚基 P47的表达，调节NADPH氧化酶的组装、活化；.4）作用于NOX2/NOX4的翻译后水平，对NOX2作用更显著；.5）通过调控NADPH氧化酶活性，降低下游MMP3、MMP9、STAT3水平，进而抑制心室重构，发挥心肌保护作用。.YXJD可能通过多个效应成分、作用于NADPH氧化酶活性调控的多个环节发挥整合效应。网络药理学分析为候选药理活性成分和靶点的发现提示了方向。.【下一步】.1）明确上述各作用环节对综合效应的贡献度，筛选核心靶点网络；.2）深入挖掘网络药理学的预测结果，药理与药化相结合，揭示关键效应成分。.最终阐明该方干预心衰氧化应激的效应成分和机制，开发新药。