钙调神经磷酸酶对足细胞内质网应激程度的调控在蛋白尿发生中的机制研究

足细胞生物学研究深化了蛋白尿发病机制，内质网应激是细胞生物学功能研究的主旋律，而钙调神经磷酸酶除激活下游NFAT途径介导免疫应答，它在细胞复杂生物网络中的指挥家的角色还没被展现！因此探索钙调神经磷酸酶怎样调控足细胞对内质网应激的反应对于理解蛋白尿的发生机制尤为重要，将更新蛋白尿个体化治疗中新旧手段的力度、排序和使用策略。研究使用可诱导性足细胞特异性高表达钙调神经磷酸酶转基因鼠和钙调神经磷酸酶过表达/基因敲除的足细胞系，前瞻观察使用钙调神经磷酸酶抑制剂(环孢素)治疗膜性肾病肾病综合征患者，证实假说足细胞钙调神经磷酸酶对内质网应激反应的程度有加重作用，影响足细胞生物学行为，参与蛋白尿发生机制。部分抑制钙调神经磷酸酶将伴有内质网对应激的反应适度，以维持内质网稳态和足细胞生理功能，延缓蛋白尿发生。为建立以内质网应激稳态调节为治疗靶点和足细胞损伤的基因靶向治疗开创坚实平台。

蛋白尿是慢性肾脏病发生和进展的独立危险因素。了解其发病机制为进一步靶点药物治疗研发新药提供平台。内质网应激是新近发现参与多种慢性疾病的发生和进展的重要途径。课题拟解决关键问题是阐明钙调神经磷酸酶在足细胞内质网应激中有怎样的串话和调控作用，为进一步理解足细胞内质网应激在蛋白尿发生中的作用以及调控提供依据。.在四年艰苦工作中，课题组以体外培养足细胞，早期糖尿病肾病小鼠动物模型，高脂饮食喂养的肾脏内质网应激动物模型，大样本膜性肾病临床病例入手，使用细胞培养、免疫组化、荧光染色、激光共聚焦、Western blot、分子生物学、转基因技术、基因测序等方法，重要发现如下：1 棕榈酸引起体外培养足细胞出现内质网应激，引起细胞凋亡,伴有钙调神经磷酸酶的表达增加，给内质网应激抑制剂后钙调神经磷酸酶的表达降低。2 观察6、9、12周龄的C57BLKS/JLepr db/db雄性小鼠,随周龄逐渐出现微量白蛋白尿,足细胞上钙调神经磷酸酶表达逐渐增加，足细胞骨架蛋白synaptopodin表达逐渐下降。3 成功建立单个足细胞标记动物模型，发现早期出现蛋白尿时足细胞形态变化不均一。4 在高脂饮食喂养大鼠模型中，表现出胰岛素抵抗和内质网应激指标蛋白水平增加，但是没有尿蛋白，肾组织多个内质网应激指标和钙调神经磷酸酶的mRNA没有变化。5 在大样本膜性肾病患者回顾性分析中，发现内质网应激指标而非钙调神经磷酸酶预测患者临床对环孢素治疗的反应。6 在膜性肾病患者肾组织的microRNA测序分析中，没有发现内质网应激治疗和钙调神经磷酸酶通路上有异常，但发现PSTAT1 表达上调。7 在糖尿病肾病患尿液蛋白质组学中，没有发现与钙调神经磷酸酶和内质网应激有关的蛋白。.目前，基金资助的论著已经发表六篇，其中SCI 四篇，中文核心期刊两篇，第七篇论著正在American Journal of Nephrology 返修，美国肾脏病年会大会发言两次，壁报交流两篇。仍在进行dbdb小鼠肾脏的钙调神经磷酸酶和内质网应激指标染色，预期整合前瞻性临床研究资料和样本，验证内质网应激对膜性肾病患者临床预后的价值。.综上，该研究项目证实内质网应激在慢性肾脏病蛋白尿发生中起重要作用，伴有钙调神经磷酸酶表达异常。调控机制应该是双向且有复杂的串话。研发调控内质网应激的药物应对进一步有效控制尿蛋白起重要作用。