靶向求源：基于负性剪接异构体产生过程探讨糖苷类药物抗脓毒症的分子机制

TLRs信号途径是触发脓毒症的始动环节。在先前NSFC资助下发现TLRs下游分子MD-2和COX-2出现新的剪接异构体（Genbank注册号:GU059938、AY157736）。进一步全面分析相关文献后，我们惊奇地发现：TLRs信号通路中几乎每个关键分子均可出现新的剪接异构体，并且这些内源性异构体能减轻炎症反应，其产生状况直接影响脓毒症的结局。因此，调控TLRs信号分子剪接异构体产生是干预脓毒症的新靶点。为此本课题拟用分子生物学、生物信息学的方法，从整体和细胞水平对这些剪接异构体分子产生机制进行研究，确定调控TLRs信号剪接异构体产生的关键剪接因子及信号分子，以此为靶点，筛选糖苷类抗炎药物，以期从中找出有效而特异的抗脓毒症药物。通过本课题的研究可阐明TLRs信号发生选择性剪接的机制，为临床脓毒症治疗提供一个全新靶点，也为探明糖苷类抗炎药物的作用机制提供理论平台，为其临床应用提供实验依据。

本研究以探讨脓毒症关键信号通路TLRs信号分子发生选择性表达的分子机理为切入点，运用整体和细胞分子脓毒症模型，结合分子生物学、生物信息学、免疫学和药理学的研究手段，从TLRs信号分子正负两个反馈系统筛选天然植物中具有抗炎作用的糖苷类药物，用于脓毒症的干预治疗和相关机制研究。通过三年的探索研究，我们得出如下结果：1.建立了基于TLRs信号的脓毒症实验动物与细胞模型；同时构建了针对TLR信号异构体分子表达的特异性检测系统，完善了脓毒症分级程度的评价指标。2.筛选了25种糖苷类和15种非糖苷类中药单体抗炎药物，确证了7种有效的抗脓毒症药物，并初步探明了相关分子机制。3.明确了基于TLR4、IRAK-1和MyD88三种关键分子负性调控TLR信号通路，并减轻脓毒症炎症反应的异构体及其调控机制，发现了三个重要反式剪接调控因子，其中SRp35、ASF为剪接增强子、hnRNPA1为剪接抑制子。4.初步揭示了控制TLR信号通路中三种关键分子选择性表达的部分上游信号机制，包括PPAR-gamma、alphavbeta3、HO-1、ALX、beta-catenin及IRAK-M。5.筛选了4个既能影响TLR4信号通路选择性表达又有效抗脓毒症的糖苷类药物，同时我们又基于药物构效关系，通过化学改造合成了两个新型化合物。总之，通过本课题的研究为基于TLRs信号通路中关键分子选择性表达的分子靶标的药物干预和开发提供了一个理论平台，也为脓毒症相关的炎症性疾病研究提供了一个新的方向。