Tourette综合征复发病机“外风引动内风”的神经免疫机制

The difficulty of treatment of Tourette syndrome (TS) are recurrence and complication. The pathogenesis of TS form Traditional Chinese Medicine is “external wind stirs internal wind” . Combined with our previous research, a hypothesis was established: Nerve-immunity axis. Exogenous pathogenic (LPS and RSV, “external wind”) caused the imbalance of peripheral cytokines, and cytokines activated JAK2/STAT3 pathway (“stirs”), and further activated microglia, which resulted in imbalance of nerve-immunity axis (“internal wind”). The above process caused the development of TS. We used classical animal models and primary microglia cell model to investigate the pathogenesis of TS by Western, immunofluorescence and cell transfection. The protein of signal pathway, the activity of microglia (morphological changes, synaptic protein cd11b expression levels) and cytokines were detected before and after lipopolysaccharide (LPS) or respiratory syncytial virus (RSV) addition. In addition, high expression/silence of JAK2/STAT3 signaling pathway of microglia were established to confirm the role of JAK2/STAT3 signaling pathway in microglia. Meanwhile, we used Traditional Chinese Medicine to confirm our hypothesis. In this study, we used nerve- immunity axis to investigate the pathogenesis of TS. This will be provide new therapy and more drugs for TS.

Tourette综合征（TS）的治疗难点在于复发，中医认为其病机为“外风引动内风”；结合先期研究成果，提出复发病机的神经免疫机制假说：在外源性致病原触发下（外风），失衡的外周细胞因子启动JAK2/STAT3信号通路（引动），激活小胶质细胞，引发神经免疫反应为主的自身免疫失衡（内风），促成TS的发生发展。将建立经典动物及原代小胶质细胞模型，运用免疫荧光染色、Western-Blot等技术，观察各模型在“外风”LPS/RSV刺激前后信号通路相关蛋白、小胶质细胞活性（形态、CD11b表达）和炎性因子变化；构建JAK2/STAT3信号通路高表达/沉默的小胶质细胞模型，考察以上指标变化，进一步证实此通路对小胶质细胞活性的调节作用；同时予中药干预，从药物效应反推的角度证实假说并探索作用靶点。本项目将TS的机制研究拓展到中枢效应细胞领域，为促发新的治疗策略及新药开发提供更多可能。

Tourette综合征（TS）是儿童时期最常见的精神、运动障碍，机理未明、治疗困难。为探究其复发病机的神经免疫机制，本项目组做了以下工作：.一、建立模型 ①DOI、亚氨基二丙睛（IDPN）TS大鼠模型及施加诱导因素的DOI/IDPN+LPS/RSV模型；②小胶质细胞株（BV2）、BV2+DOI/IDPN+LPS/RSV、ADV、PAV细胞模型。.二、检测各模型外周炎症因子表达及中药的影响。酶联免疫法检测模型大鼠纹状体的炎症因子及细胞模型上清液的细胞因子，发现：与DOI/IDPN单独诱导比较，LPS可更显著提高脑组织纹状体中IL-4、IL-6、IL-17A水平、降低INF-γ与TGF-β含量；LPS及病毒可影响BV2细胞上清以上细胞因子水平，说明LPS和病毒致TS模型细胞因子失衡；静安口服液等可调节模型大鼠及BV2各组细胞因子水平、减轻外周及中枢炎症反应。.三、检测各模型JAK2/STAT3信号通路相关蛋白的表达水平及中药的影响。 模型大鼠取纹状体、细胞取上清液，采用免疫组化技术、Western blot法检测各组JAK2/STAT3通路蛋白表达水平，结果显示，与DOI/IDPN单独诱导相比，LPS及病毒可以更显著地升高各模型蛋白的表达；静安口服液等不仅可降低经典模型组的蛋白表达水平，而且可降低LPS、病毒联合诱导后的各模型P-JAK2/P-STAT3通路各蛋白水平。.四、观察小胶质细胞激活后免疫活性反应及中药的影响。 LPS及病毒诱导后，BV2细胞形态改变，静安口服液可恢复突触等形态；与DOI/IDPN单独诱导比较，LPS及病毒联合诱导可提高BV2细胞Ng蛋白及活性标志物CD11b的表达，静安口服液可降低BN2细胞CD11b、Ng蛋白表达水平、可减弱CD11b、Ng蛋白荧光表达量。.结论：.1.LPS和病毒可促使TS复发，亦即“外风”可引动“内风”。其机制推测是：LPS、病毒可诱导外周免疫细胞因子失衡，通过血脑屏障激活中枢JAK/STAT信号通路，激发小胶质细胞活性，使其形态变化、突触蛋白及活性标志分子表达增加，活化的小胶质细胞通过释放炎性因子发挥神经免疫效应，引发自身免疫失衡，进而促成TS的复发。.2.静安口服液可调节小胶质细胞CD11和Ng蛋白表达，抑制其JAK/STAT信号通路蛋白表达，从而反馈性调节外周细胞因子失衡、减轻炎症反应，直接发挥中枢免疫调节作用