复方浙贝颗粒干预miRNA-17-92介导的白血病耐药机制研究

多药耐药导致化疗无效是急性白血病患者重要死亡原因。既往研究结果证实，"痰瘀互阻"是急性白血病耐药患者临床主要证候，具有"化痰活血"功效的复方浙贝颗粒（方剂组成：浙贝母、川芎、防己）联合化疗能有效提高化疗缓解率。复方浙贝颗粒通过下调Pgp逆转白血病细胞多药耐药性，但其分子机制目前尚不清楚。miRNA在恶性疾病如慢淋及实体瘤中的重要作用是近来研究热点，但对miRNA在急性白血病领域的研究仍处于探索阶段。我们初步研究显示，部分急性淋巴细胞白血病患者miRNA-17-92表达水平上调，化疗效果差。因此，该课题通过体内外实验体系，建立高表达miRNA-17-92的L1210细胞系及动物模型，观察细胞增殖（MTT，3H-TDR）、细胞周期、细胞凋亡（FCM），白血病缓解率，并应用实时定量PCR等方法检测与凋亡相关的基因，探明复方浙贝颗粒干预miRNA-17-92介导的白血病耐药分子机制。

多药耐药导致化疗无效是急性白血病患者重要死亡原因。既往研究结果证实，"痰瘀互阻"是急性白血病耐药患者临床主要证候，具有"化痰活血"功效的复方浙贝颗粒（方剂组成：浙贝母、川芎、防己）联合化疗能有效提高化疗缓解率。复方浙贝颗粒通过下调Pgp逆转白血病细胞多药耐药性，但其分子机制目前尚不清楚。本课题通过体内外实验体系，建立高表达miRNA-17-92的L1210细胞系及动物模型，观察细胞增殖（MTT，3H-TDR）、细胞周期、细胞凋亡（FCM），白血病缓解率，并应用实时定量PCR等方法检测与凋亡相关的基因，探明复方浙贝颗粒干预miRNA-17-92介导的白血病耐药分子机制。研究初步证实了miRNA-17-92表达水平与白血病耐药相关，复方浙贝颗粒可以通过下调miRNA-17-92表达水平逆转白血病耐药。miRNA-17- 92高表达可以引起白血病细胞产生抗药性，并具有促增殖、抗凋亡的作用。高表达miRNA-17-92-L1210细胞增殖率较高，VCR对L1210及高表达miRNA-17-92-L1210细胞系的增殖抑制率有明显差异，高表达miRNA-17-92导致白血病细胞对VCR产生抗药性。高表达miRNA-17-92-L1210细胞耐凋亡，24h早期凋亡细胞比例明显低于L1210组，也低于L1210/ddp组。复方浙贝颗粒与阿霉素配伍使用，高表达miRNA-17-92的L1210细胞组凋亡细胞比例增加，明显增加高表达miRNA-17-92-L1210的BAX表达水平及FAS表达水平，促进细胞凋亡。高表达miRNA-17-92的L1210细胞白血病动物模型化疗敏感性减低，复方浙贝颗粒伍用化疗药物可以提高化疗疗效。miRNA-17-92过表达可上调白血病细胞多药耐药相关蛋白基因Pgp。分离难治性恶性淋巴瘤/急性淋巴细胞白血病患者外周血淋巴细胞，应用MTT法检测阿霉素、顺铂、长春新碱药物对淋巴细胞增殖的抑制率，均提示耐药，应用real-time PCR的方法检测miRNA-17-92表达水平及miRNA-17-92各簇相对定量。与非耐药淋巴瘤患者相比，miRNA-17-92表达水平明显升高，miRNA-17-92簇中Mir-17、Mir-17’、Mir-18a、Mir-19a、Mir-19b、Mir-20a六簇表达均增高，临床治疗效果较差。