Caspase-3剪切白血病相关蛋白AML1-ETO的生物学意义

染色体t (8; 21)易位产生的AML1-ETO融合基因在M2型急性髓系白血病(AML)的发生中起了重要作用，但它的单独存在并不足以引起白血病，提示可能需要 "第二次打击"。最近，本课题组报道AML1-ETO的诱导表达显著增强AML细胞的凋亡敏感性。在此基础上，进一步发现AML1-ETO是Caspase-3的底物，并且AML1-ETO的剪切是其凋亡增敏作用所必需的。本课题将以这些重要发现为基础，进一步通过逆转录病毒系统建立表达野生型AML1-ETO、剪切位点突变体及其剪切片段的小鼠造血祖细胞株和小鼠骨髓移植模型，以在细胞和整体水平深入研究AML1-ETO被Caspase-3剪切在白血病细胞凋亡、分化以及白血病发病过程中的作用和意义。这些原创性研究对于揭示AML1-ETO相关的AML的发生机制具有重要理论意义。同时，对于细胞凋亡机制的认识及其与肿瘤发病学的关系等方面也可能提供新的观点。

本课题就融合蛋白AML1-ETO突变体和剪切片段对细胞分化的影响和在白血病发病学中的意义进行了系统研究，获得了一些原创成果: ①分别利用逆转录和慢病毒系统，建立了稳定表达野生型AML1-ETO及其突变体的小鼠造血干祖细胞32Dcl3 细胞株，并研究了AML1-ETO 及其突变体对32Dcl3细胞增殖、分化和凋亡的影响。结果显示，Mig-AML1-ETO189-752这一剪切片段显著抑制32Dcl3细胞的增殖和分化；189-752的表达促进VP16所诱导的32Dcl3细胞凋亡，而369-752则对凋亡有显著的抑制作用；②利用构建的AML1-ETO 慢病毒系统建立了小鼠骨髓移植模型，并观察了AML1-ETO突变体的体内生物学效应；③收集临床t（8;21）阳性的AML 病人标本，应用RT-PCR扩增AML1-ETO 基因的cDNA，并进行了序列测定。该研究不仅为探索AML1-ETO 相关的白血病的发生机制提供了重要理论依据，还为细胞凋亡机制的认识及其与肿瘤发病学的关系提供了新的思路。实施期间项目主持人在影响因子8.849的《Cell Death & Differentiation》等国际期刊发表论文3篇，作为负责人获得教育部高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金和上海交通大学医学院新“百人计划”的资助，培养博士研究生2名。