电化学ELISA检测法诊断正畸牙根吸收研究

牙根吸收是正畸治疗的并发症，严重的牙根吸收会导致患者牙齿松动、脱落，但目前尚无能够及时精确诊断牙根吸收的方法。本研究重点围绕电化学ELISA法牙根吸收生化诊断相关工作展开，设计电化学ELISA法诊断牙根吸收生化检测体系，确定龈沟液中牙本质磷蛋白（DPP）含量检测方案；建立动物牙根吸收模型研究牙根吸收过程中DPP含量变化与牙根吸收程度的密切关系，对比影像学方法、传统及电化学ELISA检测法诊断牙根吸收的精确性,论证电化学ELISA法应用于牙根吸收精确诊断的可行性；提取临床患者龈沟液探讨人龈沟液中DPP含量与牙根吸收进展的相互关系，印证电化学ELISA法在临床上精确诊断牙根吸收的技术优势。.本研究打破了使用影像学方法诊断牙根吸收的传统观念，有望对牙根吸收的诊断方法提出新的观点。研究结论对于牙根吸收的精确诊断具有重要的参考价值；同时可为减少正畸治疗风险、防治正畸并发症起到积极的推动作用。

正畸牙根吸收是正畸治疗的主要并发症，大多数患者在正畸过程中都会出现轻度牙根吸收，严重者牙齿会出现松动甚至脱落。牙根吸收的早期诊断可以防止患者牙齿松动加重或脱落。影像学方法简便直观，但是其诊断出的牙根吸收显著滞后于实际牙根的不可逆病理性吸收，另外由于影像学方法存在辐射损伤，不可能使用该方法对牙根吸收的进展状况进行纵向观察，迫切希望能够通过一种更为敏感、安全、及时的新方法实现对牙根吸收的早期诊断、早期预防。电化学酶联免疫吸附检测(ELISA)方法是将酶联免疫吸附检测法同电化学分析相结合的一种新方法,它结合了免疫分析的高特异性和电分析化学的高灵敏度,其原理是将酶联免疫吸附检测同酶催化产物的电化学检测相结合,精确检测酶催化底物反应产生的电活性产物。电化学ELISA法灵敏度高，检测范围宽，非常适用于少量样品的分析，且易于实现自动化和连续化。电化学ELISA法的卓越优势使得快速、精确、稳定测定龈沟液中牙根吸收特异性蛋白含量变化成为可能，为正畸牙根吸收的诊断开辟了一条更为有效、新颖的研究思路 。本项目致力于建立精确测定牙根吸收特异性蛋白-牙本质涎磷蛋白（DSPP）含量的电化学ELISA测试方法，搭建电化学ELISA检测装置，基于电化学ELISA方法实现患者龈沟液中DSPP含量的精确检测，验证电化学ELISA法精确诊断正畸牙根吸收的可行性和可靠性。项目研究建立了涵盖邻联茴香胺（ODA）、邻苯二胺（OPD）、邻联甲苯胺（OT）、四甲基联苯胺(TMB)等四种底物的双氧水（H2O2）-辣根过氧化酶（HRP）电化学酶联免疫检测体系，优化了反应体系组成、浓度、酸碱度、反应温度等体系关键指标；搭建了通过控制滴汞电极准确电位、测试电极氧化还原电流以实现DSPP精确测试的极谱反应测试体系，测定了四种体系的检测限、线性范围、精确度等关键指标，验证了电化学ELISA法具有明显低于传统ELISA法的检测下限；基于电化学ELISA方法检测了牙根吸收患者龈沟液中的DSPP含量，对比了电化学ELISA检测体系和分光光度ELISA体系检测患者龈沟液中DSPP含量的结果，证明二者在检测同一样本DSPP含量时无显著性差异，充分证实电化学ELSIA方法能够实现牙根吸收患者龈沟液中DSPP含量的精确检测，在此基础上形成了一种全新的牙本质涎磷蛋白无损精确检测方法，为正畸过程中牙根吸收的早期准确诊断提供了一种全新的途径。