补阳还五汤对环境代谢因素致高血压前期血管损伤保护机制研究

This project focused on prehypertension and it inducer-environmental metabolic factors (EMF). According to the prevention theory, we establish the therapeutic strategies: treatment starting from spleen. Firstly, using EMF-induced-prehypertension rat model, we assess the treatment of Buyanghuanwu Decotion (BYHWD) from: subset ratio of immune cells in the peripheral blood, infiltration of immune cells, expression of inflammatory gene and secretion of inflammatory cytokines. Secondly, using cell model, we address if BYHWD can antagonize the effect of Hcy and the possible targeting site since BYHWD and inflammation factor-Hcy share the same pathways: NF-KB and MAPK. Finally, we determine the effect of BYHWD on proliferation, apoptosis and migration of vascular endothelial cell as well as differentiation of smooth muscle cell. These studies will reveal the molecular mechanism of EMF-induced vascular injury and the balance of inflammatory and anti-inflammatory, supporting the clinical application of BYHWD.

本研究拟从高血压前期入手，围绕环境代谢因素致高血压这一主线，根据"治未病"理论，确立从脾论治的思想，以环境代谢因素（肥胖、高盐）刺激的高血压前期动物模型以及血管内皮细胞和平滑肌细胞为研究对象，以补阳还五汤为施治因素，从血管炎症反应切入，观察补阳还五汤对周围血液中免疫细胞亚群的比率、免疫细胞浸润、激活及血管组织中炎症相关基因的表达和炎症因子分泌的特征；观察含硫氨基酸代谢产物促炎症因素（Hcy）与抗炎症因素（补阳还五汤）的共同信号通路NF-κB和MAPK通路及黏附迁移相关分子为靶点的相互拮抗作用，观察大鼠含药血浆（补阳还五汤）对血管内皮细胞增殖、迁移和凋亡；血管平滑肌细胞的增殖、分化和迁移的影响，明确环境代谢因素介导的炎症反应和免疫细胞激活导致血管损伤的机制；揭示促炎症/抗炎症平衡稳态调节的分子机制，阐释补阳还五汤前期干预及增强内源性抗高血压措施能有效防治高血压前期血管损伤。

高血压是由环境代谢因素和遗传因素共同作用所致的一种多基因和多因素的复杂性疾病。早期防治高血压发生发展，有效阻断高血压靶器官损害及相关并发症具有很大作用潜力。必须将高血压研究和干预重点聚焦于高血压前期，即以调控环境代谢因素从脾论治从而阻止或逆转高血压前期损害。本项目观察了补阳还五汤干预环境代谢因素通过炎症/免疫信号通路启动高血压血管损伤的发生机制，阐释了补阳还五汤前期干预及增强内源性抗高血压措施有效防治高血压前期血管损伤机理。. 本项目利用流式技术检测大鼠血清中免疫细胞亚群的比率；利用PCR-array技术检测免疫与炎症相关基因的表达；NF-κB和MAPK信号转导通路及黏附迁移相关分子基因及蛋白表达；血管内皮细胞增殖、迁移和凋亡相关信号转导通路信号分子基因及蛋白表达；细胞动态可持续系统观测血管平滑肌细胞的增殖和迁移。又扩展性的研究了补阳还五汤对Dahl盐敏感大鼠介导的高血压前期模型肾脏CaM/NO信号通路、NO/cGMP/PKG信号通路、KKS信号通路、P38 MAPK/FN信号通路的干预作用以及对肾脏成纤维细胞异常转化作用。. 研究表明补阳还五汤可以特异性增高高血压前期大鼠淋巴细胞CD4+/CD8+比例，降低INF-γ、TNF-α含量，增强机体免疫能力，抑制其炎性因子的分泌；减少TNF-α的释放，抑制NF-κB信号通路上的关键因子TRAF-6、IKKβ、NF-κB mRNA的表达，缓解其介导的炎症反应，抑制黏附迁移相关分子的分泌，保护血管内皮功能，减轻血管损伤。降低MCP-1、VCAM-1、ICAM-1的mRNA表达及P-selectin、E-selectin蛋白含量，可以保护血管内皮功能。PCR array结果表明，补阳还五汤可以通过抑制细胞凋亡、促进巨噬细胞释放相关白细胞介素发挥调节免疫与炎症作用、减少促炎因子的释放从而保护肾脏正常生理机能。对于肾脏相关信号通路的研究发现，补阳还五汤可以特异性激活肾脏CaM/NO、NO/cGMP/PKG、KKS、P38 MAPK/FN等相关信号通路，抑制高血压前期肾脏炎症与纤维化发生发展。阐释了补阳还五汤前期干预及增强内源性抗高血压措施防止高血压前期发生发展的作用，为健脾益气活血法防治高血压前期发生发展及其并发症发生提供生物学依据。