青蟹呼肠孤病毒（MCRV）与青蟹双顺反子病毒（MCDV）共感染及相互影响机制

Scylla paramamosain is an economically important species cultivated in China for the past 100 years, However, mass mortalities occurred in the cultivated mud crab population and resulted in significant economic losses by co-infection of mud crab reovirus (MCRV) with mud crab dicistrovirus (MCDV). 80% cultured mud crab was infected by MCRV with MCDV, and co-infection of MCRV and MCDV were detected in all diseased mud crab. To elucidate the viruses co-infection mechanism , the project aim to indentify interaction proteins of MCRV and MCDV and combine site of these proteins, study MCRV, MCDV and interaction proteins inhibit antivirus immune response of mud crab, and pathogenic relationship between MCRV and MCDV.

拟穴青蟹是我国重要的海水养殖种类，青蟹呼肠孤病毒（MCRV）和青蟹双顺反子病毒（MCDV）是近年来发现的感染青蟹非常普遍的2类新的病毒，MCRV和MCDV共感染青蟹比例超过80%，患病青蟹2种病毒共感染为100%，2种病毒在青蟹中存在共感染现象，在致病性方面有依赖性。本项目拟通过开展MCRV和MCDV相互作用蛋白及作用位点鉴定、MCRV和MCDV蛋白与互作复合物对宿主抗病毒免疫的调控及其与共感染的关系、MCRV和MCDV感染依赖性和致病性的关系等研究，阐明MCRV和MCDV共感染拟穴青蟹机制，揭示2种病毒感染和致病的依赖关系，为2种病毒共感染疾病的防治提供理论指导，也为其他多种病毒共感染机制的研究提供借鉴。

拟穴青蟹是我国重要的海水养殖种类，青蟹呼肠孤病毒（MCRV）和青蟹双顺反子病毒（MCDV）是近年来发现的感染青蟹非常普遍的2类新的病毒，MCRV和MCDV共感染青蟹比例超过80%，患病青蟹2种病毒共感染为100%，2种病毒在青蟹中存在共感染现象，在致病性方面有依赖性。本项目主要开展（1）MCRV和MCDV相互作用蛋白及作用位点鉴定、（2）MCRV和MCDV与互作蛋白复合物对宿主抗病毒免疫调控及与共感染的关系和（3）MCRV和MCDV感染依赖性和致病性的关系等三个方面的研究。.通过流行病学调查和电镜观察MCRV和MCDV存在共感染现象，运用RNAscope双染技术检测到MCRV和MCDV的RNA在拟穴青蟹组织中出现位置邻近及重叠，位置的重叠为两病毒互作提供可能；进一步通过酵母双杂交技术、CO-IP和免疫荧光实验证实MCDV的结构蛋白可以与MCRV的结构蛋白S11和S12相互作用，为MCRV和MCDV共感染提供了分子层面的基础，揭示了MCRV和MCDV相互作用蛋白鉴定与作用位点。.在MCRV和MCDV共感染拟穴青蟹的情况下，利用RNAi技术研究两病毒蛋白的相互作用对病毒复制的影响，发现当抑制了MCDV-VP1后不但明显抑制了MCDV的复制，也明显影响了MCRV复制；当抑制了MCRV-S11后MCRV的复制受抑制，同时也抑制MCDV的复制，比对MCRV的影响大，说明MCDV-VP1对MCRV、MCRV-S11对MCDV的感染复制具有依赖性，说明 1种病毒感染与复制依赖另外1种病毒的蛋白。.通过酵母双杂交技术筛选病毒蛋白与宿主互作的候选基因，并通过CO-IP和免疫荧光证实相互作用。证实了MCRV-S11与SpFAMeT和SpCSTF相互作用，MCRV-S12与SpVDAC和SpLDH相互作用，这些宿主蛋白可能就是病毒逃逸的分子基础。同时为了研究两种病毒及互作复合物对拟穴青蟹主要抗病毒先天性免疫途的调控机制，我们开展了宿主的抗病毒免疫通路研究，克隆了拟穴青蟹抗病毒免疫通路关键基因Dicer2、TRBP1、AGO2、IKKε1、IRF、Vago、Domeless、JAK、STAT、IFI27L2的全长；并进一步研究了拟穴青蟹JAK/STAT通路关键基因克隆及抗病毒功能；也发现拟穴青蟹NF-κB通路不仅参与抗细菌免疫反应，还具有抗病毒免疫功能。