IL-17上调类风关滑膜细胞Cyr61表达时转录因子作用和调控研究

2009年底我们在国际上率先报道了IL-17通过上调RA滑膜细胞中Cyr61表达，并由此介导滑膜细胞过度增生（Arthritis & Rheumatology， 2009，60：3602－3612）。首次明确了IL-17和Cyr61导致滑膜过度增生作用，受到国际同行关注。但表达调控机制不清。已有在肿瘤细胞/成纤维细胞中获得的Cyr61表达调控结果表明均是NF-κB和AP1单独作用。而我们发现在RA滑膜细胞增殖中，IL-17必须同时活化NF-κB和AP1通路才能诱导Cyr61表达。但这两条通路作用是协同还是叠加？是否需要其他转录因子的配合？如何作用等均不清楚。因此，本项目拟在已有原创性研究基础上，重点分析IL-17作用后，Cyr61启动子区域中NF-κB和AP1相互作用及与其他转录因子的调控机理，为明确IL-17上调RA滑膜细胞Cyr61表达机制和寻找RA临床诊治新靶点提供理论与实验依据。

类风湿性关节炎（RA）是一种由多种因素共同造成的全身性慢性自身免疫性疾病，以关节滑膜组织过度增生，骨与软骨破坏为主要特征。Cyr61/CCN1是一种新的前炎症因子，具有促进类风关病人滑膜细胞增殖及上调IL-6表达而参与并加重炎症反应和组织损伤。本研究通过一系列研究，对于Cyr61转录的表观遗传学和转录后调控进行了研究，获得重要结果：.1、Cyr61转录的表观遗传学调控：我们分析了组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase enzyme, HDAC)在IL-17上调RA滑膜细胞（FLS）Cyr61表达过程中的调控机制。结果显示：RA病人滑膜组织和细胞中高表达HDAC1，并且IL-17刺激又能促进滑膜细胞中组蛋白乙酰化酶1（HDAC1）表达升高。HDAC抑制剂曲古抑菌素（TSA）能上调IL-17诱导滑膜细胞Cyr61的表达，而尼克酰胺（NAM）不能。加入NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)能够明显的抑制TSA对Cyr61的上调作用。以上结果提示HADC1通过作用于转录因子NF-κB参与了IL-17上调滑膜细胞表达Cyr61的过程。.2、Cyr61的转录后调控：我们首先通过常用的软件预测可能参与Cyr61调控的miRNA。经过比对和筛选，我们选择用TargetScan预测的miR-22进行实验，发现miR-22的确可结合在Cyr613’UTR，抑制Cyr61转录后表达。进而，通过Taqman探针检测，我们发现miR-22在RA滑膜组织中表达降低，从而使得Cyr61表达升高，进一步功能实验证实了转染miR-22后RAFLS中的Cyr61表达降低，FLS的粘附，增殖和迁移都随之降低。继而发现p53能够结合在miR-22的启动子上促进miR22表达。而在RA中，p53发生突变而不能启动miR-22表达，使得miR-22表达降低，并由此导致Cyr61表达增高。本研究阐明了Cyr61的转录后调控机制，同时拓展了p53的生物学作用，提示p53不仅与细胞增殖相关，还能够通过对Cyr61转录后调控而间接参与其对于Th17细胞分化的影响及RA的炎症反应。