苏木治疗CVB3m诱导的病毒性心肌炎小鼠的作用机制研究

免疫反应在病毒性心肌炎的发病及演变过程中起重要作用，而苏木具有明确的免疫抑制作用，本研究拟通过观察苏木对病毒性心肌炎小鼠模型及体外培养心肌细胞病毒感染模型的影响，阐明其作用机制。研究采用腹腔接种CVB3m病毒的方法建立小鼠急、慢性病毒性心肌炎模型，病毒滴定原代分离的心肌细胞，建立心肌细胞病毒感染模型。心脏超声测定模型小鼠心腔结构变化；HE、VG染色法观察模型小鼠心肌组织病理形态学变化；电镜观察模型小鼠心脏及病毒感染心肌细胞超微结构变化；酶耦联速率法测定模型小鼠心肌组织和病毒感染心肌细胞心肌酶学的变化；免疫组化法检测模型小鼠心肌组织相关免疫指标的变化；流式细胞仪检测模型小鼠T细胞亚群的变化；RT-PCR法检测模型小鼠心肌组织CVB3m含量及相关免疫指标的变化。血清药理学方法筛选出苏木治疗病毒性心肌炎的有效部位或部位群。

通过混合淋巴细胞反应试验MLR实验筛选苏木有效部位群，实验证实苏木乙酸乙酯具有良好的免疫抑制作用。采用CVB3m单次感染的方法建立小鼠急性病毒性心肌炎的模型。HE染色法观察急性病毒性心肌炎小鼠心肌组织病理形态学变化；电镜观察病急性毒性心肌炎小鼠心脏超微结构变化；采用免疫组化法测定小鼠心肌组织N-csdherin、细胞凋亡、Bax蛋白、Bcl-2蛋白、IFN-γ的含量。流式细胞术检测外周血Th细胞的变化。PCR法检测小鼠心肌组织CVB3mmRNA 、PFPmRNA、GraBmRNA的表达。结果表明苏木乙酸乙酯提取物能减轻病毒性心肌炎急性期小鼠模型心脏组织的病理损害，对心肌组织具有一定的保护作用；能显著降低病毒性心肌炎急性期小鼠模型心肌酶的升高，且无肝肾损伤；能显著降低毒性心肌炎急性期小鼠模型外周血CD4+T、CD4+T/CD8+T水平,升高CD8+T水平；能够下调急性病毒性心肌炎小鼠心肌组织N-csdherin蛋白、IFN-γ、Bax蛋白的表达，上调Bcl-2蛋白的表达，抑制模型小鼠心肌细胞的凋亡；苏木乙酸乙酯提取物能够抑制急性病毒性心肌炎小鼠心肌组织相关免疫指标的表达。采用反复增量腹腔接种CVB3建立慢性病毒性心肌炎小鼠模型。心脏超声测定小鼠心脏左室舒张末期内径(LVEDD)，左室收缩末期内径(LVESD)，左室射血分数(LVEF)和左室缩短分数(FS)。HE、苦味酸天狼猩红染色法观小鼠心肌组织病理形态学变化。电镜观察小鼠心肌细胞超微结构的变化。生化法检测小鼠血清心肌酶学及肝功、肾功的变化。流式细胞术法检测小鼠外周血Th的变化。免疫组化法检测小鼠心肌N-csdherin蛋白、细胞凋亡及相关基因bax、bcl-2的变化。Real-Time PCR 法检测小鼠心肌组织CVB3mmRNA 、CXCL12mRNA、SASH1mRNA、TIR3mRNA 、TIR8 mRNA、TGF-β1 mRNA、P-Smad3 mRNA的表达。结果表明苏木乙酸乙酯提取物能够减轻慢性病毒性心肌炎小鼠心肌的病理损伤；能够改善慢性病毒性心肌炎小鼠心肌的心脏功能，抑制心脏肥大；无肝、肾毒性；能显著降低毒性心肌炎慢性期小鼠模型外周血CD4+T、CD4+T/CD8+T水平,升高CD8+T水平；能够下调慢性病毒性心肌炎小鼠心肌组织N-csdherin蛋白、Bax蛋白的表达，上调Bcl-2蛋白的表达，抑制