Treg失稳因TIGIT/PVR通路下调而加剧：1型糖尿病逐渐进展的新机制?

1型糖尿病（T1DM）发病是由于CD4+CD25+Foxp3+ 调节性T细胞（Treg）失稳：即Treg表达Foxp3逐渐丢失而向效应T细胞分化。DC分泌IL-10减少很可能是Foxp3丢失的关键点。我们的前期研究发现：TIGIT在小鼠Treg上组成性高表达，Treg-DC之间可能存在TIGIT/PVR通路使DC分泌IL-10。故我们推测：Foxp3驱动Treg表达膜蛋白TIGIT；NOD小鼠（T1DM的经典动物模型）存在"Foxp3丢失-Treg失稳-Treg表面TIGIT下调-TIGIT/PVR通路减弱-DC分泌IL-10减少-Foxp3丢失"正反馈环。本项目拟在体外实验基础上，建立Treg体内动态示踪模型，以Treg-DC之间的TIGIT/PVR通路为主线，探讨上述假设，并人为加强或阻断上述正反馈环，观察NOD小鼠发病及免疫状态的改变，为阻断或延缓T1DM的发生提供理论和实验依据。

TIGIT是一个新鉴定的免疫调节分子，主要在效应T细胞和调节性T细胞（Treg）表面表达。然而其在1型糖尿病（T1DM）发病中的机制尚不明确。在本项目的支持下，我们发现：小鼠Treg组成性表达TIGIT，活化后进一步显著上调。利用小鼠TIGIT胞外段与人IgG3 Fc段组成融合蛋白，构建成慢病毒载体。在发病前的NOD小鼠后肢肌肉内进行慢病毒注射，分泌可溶型TIGIT-Fc融合蛋白，可显著减少NOD小鼠的发病。NOD小鼠发病减少与CD4+CD25+Foxp3+Treg和CD1dhiCD5+CD19hi调节性B10细胞生成增加有关。慢病毒基因治疗组的NOD小鼠胰岛炎症评分明显低于对照组。由于慢病毒感染淋巴细胞的效率低，原计划进行慢病毒感染淋巴细胞的过继输注实验没有能如期进行。但是，通过慢病毒过表达实验，我们可以得出以下结论：TIGIT/PVR通路活化可阻止/减少NOD小鼠T1DM的发生，为T1DM的干预提出了可行的治疗方案。除此以外，我们发现天然免疫的另一细胞巨噬细胞（Mφ）可在内毒素等的刺激下高表达TIGIT的受体PVR，这种上调效应呈时间和浓度依赖。而既往的研究集中于树突状细胞，成熟的巨噬细胞和外来因子刺激的Mφ一样，高表达PVR。在TIGIT-Fc融合蛋白的刺激下，Mφ由M1炎症表型向M2免疫调节表型进行转化，并可阻止致死性内毒素性休克。Mφ激活TIGIT/PVR通路后，通过抑制NF-κB因子的转录活性，促进转录因子c-Maf的转录活性，从而促进巨噬细胞大量分泌抗炎因子IL-10，而抑制分泌炎症因子TNF-α，IL-6和MCP-1。本项目表明：外来刺激可促进天然免疫细胞表达PVR受体，这种上调或是一种内源性的免疫负调节机制。激活TIGIT/PVR通路可显著下调天然免疫的促炎因子的生成，促进抗炎因子IL-10的生成，这种改变与Mφ的转录因子NF-κB活性受抑，而c-Maf活性增强有关；激活TIGIT/PVR通路有利于调节性细胞亚群Treg和B10细胞的生成，减少NOD小鼠发病，逆转致死性内毒素性休克。这一研究为T1DM的防治，各种炎症性疾病的干预有提示意义。