Jak2介导的磷酸化调控B细胞自噬的分子机制在抗体产生及体液排斥反应中的作用研究

The role of antibody mediated humoral rejection (AMR) after organ transplantation has aroused more and more academic attention. According to the characteristics and clinical importance of B cell mediated AMR, we refer to the effect in previous experiments of JAK2 missing, which can significantly reduce B cells production of antigen-specific antibodies and inhibit Beclin-1 expression, and sought to propose a research about the role of JAK2 in the B cell autophagy regulation and humoral rejection. Using gene targeting, confocal fluorescence labeling and IP-MS technology, we will study the role of JAK2 in B cell activation and differentiation, especially in the molecular regulation between B cell and autophagy body and ensuing production of antibody. We plan to adopt Rag1-/- mice as receptor to establish the model of AMR, and study the role of JAK2 in regulating B cells to produce alloantibody in vivo, and look forward to find potential effects in the prevention and treatment of graft AMR, providing new strategies for prevention and control of the AMR.

器官移植后抗体介导的体液排斥反应(AMR)的作用越来越受到移植学界的重视。针对B细胞介导AMR的特点和临床重要性，结合前期实验中Jak2缺失显著降低B细胞产生对抗原的特异性抗体、并显著抑制Beclin-1等基因表达的作用，我们拟研究Jak2分子调控B细胞自噬的分子机制在抗体产生及体液排斥反应中的作用。采用基因打靶、荧光标记共聚焦、IP-MS等技术研究Jak2调控B细胞活化、分化及产生抗体的分子机制，重点研究Jak2调控B细胞对抗原的自噬体形成的分子调控机制及对B细胞产生抗体的影响。采用以Rag1缺陷小鼠为受体建立的AMR模型，在体研究Jak2调控B细胞产生同种抗体的作用及其在防治移植物AMR中的效应和机制，为AMR的防治提供新的策略，具有重要的科学意义。

体液性排斥反应在肾脏、肝脏等实体器官移植的排斥过程中发挥重要的作用。针对B细胞介导AMR的特点和临床重要性，我们研究了Jak2分子调控B细胞自噬的分子机制在抗体产生及体液排斥反应中的作用。首先建立诱导性Jak2基因敲除小鼠模型，发现Jak2缺陷后B细胞的活化及抗体形成能力降低，对李斯特杆菌的早期清除能力下降。进一步研究发现在TD抗原诱导的TD免疫应答中，Jak2敲除小鼠在免疫后第14天时脾脏中IgG+B细胞数量降低，且其IgM第3、7天的分泌量远远低于野生小鼠； Jak2缺失抑制IgG类抗体在TD免疫应答中的分泌，而二次免疫后Jak2缺失对机体二次免疫应答影响较小。TD抗原免疫Jak2缺陷小鼠，其脾脏PFC抗体形成能力受损，IgG、IgM的分泌水平明显低于同窝野生型小鼠，IL-10的分泌量明显增高；脾脏中CD27+记忆性B细胞比列变化不大，而 CD138+浆细胞的比例降低。Jak2缺失抑制B细胞自噬基因的表达及B细胞的增殖与凋亡。体内研究发现Jak2缺失可明显延长心脏移植物存活期；分析心脏移植物中的细胞发现移植物中炎症细胞浸润明显降低，C4d、IgG的表达明显减少，同时血清中DSA水平明显降低。Jak2基因敲除组的小鼠脾脏B细胞数量减少，Tfh细胞的比例无变化，生发中心B细胞比例明显减少。免疫荧光检测发现Jak2基因敲除组小鼠脾脏浆细胞的数量明显降低。Jak2缺失影响DSA生成的机制可能与生发中心B细胞的形成有关，与Tfh细胞无关。Jak2缺失后脾脏中自噬小体明显减少。同种移植后Jak2缺陷小鼠脾脏B细胞中LC3 II以及Beclin-1水平下调，但mTORC 1和mTORC 2蛋白水平无明显变化。这些结果提示我们，Jak2可能是通过Beclin-1影响B细胞的自噬，进而影响脾脏中B细胞的数量。研究结果提示Jak2缺失可以减轻体液性排斥反应，可为免疫相关性疾病特别是AMR的防治提供实验数据。