缺氧诱导下受体型酪氨酸激酶EphA2高表达及调控脑胶质细胞瘤血管生成的机制研究

受体型酪氨酸激酶EphA2在多种恶性肿瘤中高表达，对维持肿瘤恶性表型具有重要作用。缺氧是促进脑胶质瘤恶性进展的重要因素，其机理主要在于促进血管生成。在前期研究中，我们首次发现EphA2的表达与恶性脑胶质瘤组织内的血管生成成正相关。尽管有研究证实缺氧微环境可诱导EphA2在正常上皮组织中表达上调，但是否可上调脑胶质瘤中的EphA2表达并进而诱导血管生成尚有待证实。结合文献和本课题组的前期研究结果，我们认为很有可能存在缺氧→EphA2→效应分子的胶质瘤血管生成调控通路。本项目拟从验证EphA2诱导胶质瘤血管生成入手，利用包括基因芯片和蛋白质组学的方法筛选缺氧诱导下EphA2高表达及调控脑胶质细胞瘤血管生成的相关信号分子，深入分析可能的分子机制，为发现胶质瘤生物治疗新靶点提供理论基础和实验依据。

受体型酪氨酸激酶EphA2在多种恶性肿瘤中高表达，对维持肿瘤恶性表型具有重要作用。缺氧是促进脑胶质瘤恶性进展的重要因素，其机理主要在于促进血管生成。在前期研究中，我们首次发现EphA2的表达与恶性脑胶质瘤组织内的血管生成成正相关。尽管有研究证实缺氧微环境可诱导EphA2在正常上皮组织中表达上调，但是否可上调脑胶质瘤中的EphA2表达并进而诱导血管生成尚有待证实。结合文献和本课题组的前期研究结果，我们认为很有可能存在缺氧→EphA2→效应分子的胶质瘤血管生成调控通路，本项目拟利用多种试验方法验证上述科学假设，并探索其可能的分子机制，为发现胶质瘤生物治疗新靶点提供理论基础和实验依据。.本课题完成了如下具体内容：1、检测了胶质瘤细胞系和组织中EphA2、EphrinA1的表达；2、构建了EphA2和HIF-1α的干涉载体和过表达载体； 3、检测了EphA2、HIF-1α干涉载体瞬时转染对胶质瘤细胞系中EphrinA1、NF-κb、Caspase-3、Survivin和VEGF等肿瘤相关因子表达，以及胶质瘤细胞体外侵袭和克隆形成能力的影响；4、筛选了稳定转染EphA2、HIF-1α干涉载体和过表达载体的胶质瘤细胞株；5、建立了胶质瘤裸鼠移植瘤模型，检测移植瘤组织中EphA2表达和MVD、血管生成相关转录因子的关系；6、建立了胶质瘤缺氧培养模型，检测胶质瘤缺氧培养下EphA2表达变化；7、检测HIF-1α RNA干涉载体及真核表达载体转染对EphA2表达和胶质瘤血管生成的影响。.通过上述实验，发现EphA2在U251和A172细胞中高表达，在U87和SHG44细胞中缺失表达。EphrinA1在U87、SHG44和A172细胞中高表达，在U251中低表达。EphA2在部分胶质瘤和血管内皮细胞高表达，在部分肿瘤标本和正常脑组织中不表达。瞬时转染EphA2和HIF-1α干涉载体后胶质瘤细胞EphrinA1表达下调，转染EphA2干涉载体后U251细胞中NF-κb、Caspase-3和Survivin等表达无变化。EphA2干涉载体的转染降低了U251、A172细胞的体外侵袭和克隆形成能力。接种胶质瘤细胞于裸鼠背部皮下，建立裸鼠胶质瘤移植瘤模型。以U251细胞为实验对象，在对数生长期的细胞中加入不同浓度的CoCl2，结果显示CoCl2在10μM时可以模拟缺氧环境。缺氧条件下HIF-1