基于Rough集的“恐伤肾”小鼠分子免疫机制研究

课题采用猫吓鼠结合反吊水实验、空瓶实验、慢性郁证应激三种心理应激方法，进行行为学评价，完善"恐伤肾"应激模型；同时给予金匮肾气丸，对造模动物一般情况、行为反应、内分泌、免疫学等方面的各项指标进行观察，研究在应激不同时段（7天、14天、21天）检测脑区即早基因的表达及信号传导通路的各项指标，检测脑区即早基因c-fos、c-Jun mRNA的转录，以及信号传导通路中CRH、ACTH、ACTH受体信使RNA的表达情况，并规范收集各项指标数据；粗糙集理论是一种用于处理不确定性和含糊性知识的数学工具，课题采用先进的基于粗糙集的数据挖掘技术，分析中医"恐伤肾"动物模型各项指标间的关联关系及之间的规律联系，根据数据挖掘的结果及已有的专业知识对所提取的证候分类知识进行合理的解释与评价，建立一套基于Rough集数据挖掘技术和中医证候研究相关的科学评价体系。

目的：通过建立完善后的“恐伤肾”小鼠模型，观察模型小鼠的胸腺组织形态学的改变，选择TFAR19在细胞凋亡时呈现高表达状态的凋亡基因作为检测对象，并对小鼠的肾功能（肌酐，尿素氮，视黄醇结合蛋白，胱抑素C），免疫球蛋白（IgG, IgM, IgA）进行检测，同时使用金匮肾气丸对其进行干预，对不同时段小鼠的肾功能改变，免疫球蛋白水平，TFAR19蛋白的表达进行观察，从而探讨金匮肾气丸对胸腺细胞凋亡与凋亡抑制基因表达的调节作用，以及对慢性心理应激对小鼠造成的肾损伤以及免疫抑制的调节作用。.方法：昆明小鼠90只，随机分9组：正常7天组，恐伤肾应激7天组，金匮肾气丸干预模型7天组，正常14天组，恐伤肾应激7天组，金匮肾气丸干预模型14天组，正常21天组，恐伤肾应激21天组，金匮肾气丸干预模型21天组，每组各10只。采用猫吓老鼠结合空瓶实验，运用慢性心理应激结合程序性固定时间点不确定性给予小鼠空瓶刺激以诱发其情绪反应的应激模式，建立“恐伤肾”小鼠模型，观察小鼠应激条件下行为学的改变。干预组小鼠每天灌胃金匮肾气丸2次，每次0.8 ml。应激结束后，将小鼠断头取血，测量小鼠脾脏，胸腺，肾脏的重量，脏器指数，检验免疫指标以及肾功能指标，分析胸腺细胞凋亡以及凋亡抑制基因的表达情况。.结果：通过心理应激之后的小鼠，与正常对照组相比，应激组小鼠的体重偏轻，毛色暗黄，成屡，易受惊吓，情绪高度紧张，攻击性增强，行为学方面也发生了改变，部分小鼠对外界环境干扰的敏感度降低，反应迟钝，修饰行为减少，体力有所下降。随着应激时间的延长（14天，21天），小鼠的脏器指数及重量与对照组相比，差异明显（p< 0.05 ,或p<0.01）。 给予金匮肾气丸的干预组与正常组的差异则比应激组与正常组差异小。与此同时，应激组小鼠血清中TRAF19水平与正常组对比，差异显著（p<0.01或p<0.05），干预组的TFAR19水平低于应激组。.结论：心理应激可以导致小鼠的行为学，组织形态学，小鼠胸腺细胞的凋亡等情况也发生一定程度的变化，应激组小鼠出现细胞凋亡加速，肾功能损伤，免疫抑制，免疫力下降。通过金匮肾气丸的干预，能够有效改善小鼠的行为，延缓应激小鼠胸腺细胞凋亡的速度，降低TFAR19表达水平。对心理应激状态下小鼠的免疫功能具有一定的调节作用。