新基因hBiot2在人子宫颈癌中的生物学功能及作用机理

hBiot2是我们通过血清学筛选发现和克隆的新基因，前期研究结果提示hBiot2可能是一个与肿瘤发生发展相关的癌基因。hBiot2 mRNA在子宫内膜癌和宫颈癌中的表达较其对应的正常内膜和宫颈组织高、分化低的内膜癌及有淋巴结转移的宫颈癌较分化高的内膜癌和无淋巴结转移的宫颈癌表达高；hBiot2的表达还与大肠癌患者的预后有关。本课题的目的是在前期从RNA水平发现hBiot2表达与宫颈癌关系的基础上，拟进一步从蛋白水平研究hBiot2在宫颈癌中的生物学功能，制备hBiot2抗体解析其蛋白的相互作用蛋白，分析宫颈癌细胞中过表达或RNA干扰hBiot2表达后与其相互作用蛋白的变化来探讨其在肿瘤细胞生长、迁移等生物学功能的作用机制。免疫组化检测hBiot2蛋白在不同组织学类型的宫颈癌中的表达水平，并统计分析与分期、患者预后等。本研究将增强理解hBiot2新基因的生物学功能及其在宫颈癌发生发展中作用。

本课题首先进行了hBiot2基因的全长克隆，将hBiot2基因全长克隆到pET30a-GST质粒上，片段总大小约5kb，经测序证明克隆成功；然后将重组质粒转入大肠杆菌BL21中，进行蛋白的诱导表达及纯化；紧接着将获得的重组蛋白免疫BALB/C雌性小鼠，获得多克隆抗体，选效价最高的小鼠进行融合实验以筛选单克隆抗体；经测定单克隆抗体的大小为53kd，浓度约4.42mg/ml，纯度>90%。检测hBiot2单克隆抗体在细胞水平及组织水平的表达情况，结果显示在宫颈癌细胞株Hela及宫颈鳞癌组织中，hBiot2表达均定位于细胞质和细胞膜中；同时选取了50例人子宫颈鳞状细胞癌病例及其对应的正常宫颈组织，进行免疫组化实验，观察hBiot2单克隆抗体在不同临床分期的宫颈鳞癌组织中的表达差异，实验结果提示，hBiot2单克隆抗体高表达于人子宫颈鳞状细胞癌，而在正常宫颈鳞状上皮组织中低表达或者不表达，正常宫颈内膜腺体也不表达。这些实验结果均提示，hBiot2基因在蛋白水平也是一个与肿瘤发生相关的基因。