从ABCA1表达的JAK/STAT3信号通路探讨何首乌蒽醌类成分抗动脉粥样硬化的作用机制

In this study, we use the traditional tonifying the liver and kidney, beneficial essencehematic Guizhou authentic ingredients in Radix Polygoni Multiflori free anthraquinone as the research object, the early event Atherosclerosis (AS) cross each other in cholesterol metabolism and inflammation as the breakthrough point, ATP-binding cassette transporter A1(ABCA1) as target, through Polygonum multiflorum free intracellular cholesterol efflux of anthraquinone in effective components of intervention in ApoE-/- mice AS model and foamy macrophages process, to observe the changes of NF- κB、ABCA1、TNF- α、 LI-1 β、IL-6 expression and coronary atherosclerotic plaque stability and patholo Combined with the cell culture, molecular biology and protein micro co localization technology, in-depth study of the mediated effects on cholesterol efflux and the activation of JAK2/STAT3 signaling pathway on ABCA1 dielectric, clarify the Polygonum multiflorum Thunb as the prevention of mechanism of anti AS drug, to provide new ideas and experimental basis for the prevention and treatment of diseases using and local drug resources, has the theory significance and the development of new drugs important guiding value.

本研究以传统补肝肾、益精血的贵州道地药材何首乌中的游离蒽醌为研究对象，以胆固醇代谢和炎症反应相互交汇的动脉粥样硬化(AS)早期事件为切入点，以三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）为靶点，通过何首乌游离蒽醌有效成分干预ApoE-/-小鼠AS模型及其巨噬细胞泡沫化过程中细胞内胆固醇外流，观察ABCA1、NF-κB、TNF-α、LI-1β、IL-6表达及冠状动脉粥样斑块稳定性和病理学改变。结合细胞培养、分子生物学及蛋白质显微共定位技术，探讨其对ABCA1介导胆固醇外流及激活JAK2/STAT3信号通路的影响，阐明何首乌作为防治AS的的作用机制，为实现地方药物资源的利用及疾病的防治提供新思路和实验依据，具有重要的理论意义和新药开发研究指导价值。

1.项目背景. 动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是心脑血管疾病的主要病理基础，其中血管壁胆固醇蓄积和炎症反应所致泡沫细胞形成是其发生发展的两个关键环节,而两者又相互促进。脂质代谢紊乱尤其是胆固醇代谢紊乱是其公认的主要致病因子。三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP binding cassette transporterA1,ABCA1),参与体内胆固醇逆向转运（reverse cholesterol transport, RCT），因此具有抗AS的作用。. 何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorumthunb的干燥块根。性味苦；甘；涩；性微温，归肝、肾经；制首乌具有补肝肾、益精血、壮筋骨、乌须发之功效。现代药理证实，制首乌具有降血脂、延缓AS、抗衰老提高免疫力、益智等作用。研究何首乌游离蒽醌提取物对于AS的治疗及其作用机制，对于抗AS药物及降血脂药物的开发应用具有重要意义。.2.主要研究内容. 以新西兰大白兔和ApoE-/-小鼠构建的AS动物模型及小鼠巨噬细胞RAW264.7为对象，从ABCA1表达的JAK/STAT3信号通路、mTOR信号通路、LKB1-AMPK-ACC信号通路中mRNA和蛋白表达，探讨何首乌蒽醌类成分促进胆固醇外流，抑制泡沫细胞形成，阐明其抗AS的作用机制。.3.重要结果.研究显示，制首乌游离蒽醌及大黄素、大黄素甲醚对动物和细胞从ABCA1表达的JAK/STAT3信号通路产生良好的调控胆固醇代谢及抗AS的作用。高剂量大黄素和大黄素甲醚提高泡沫细胞内ABCA1、LXRα mRNA及蛋白表达、促进泡沫细胞内胆固醇外流的效果最优。加入JAK抑制剂AG490后，下调了泡沫细胞内LXRα mRNA及蛋白表达量，从而下调ABCA1 mRNA及蛋白表达量，抑制了高剂量大黄素和大黄素甲醚对泡沫细胞内胆固醇外流的促进作用。.4.关键数据及其科学意义. ApoE-/-小鼠AS动物模型高脂饲料配方：21%猪油，0.15%胆固醇，78.85%基础饲料。.制首乌提取物15mg/kg和7.5mg/kg对升高ApoE-/-小鼠胸主动脉ABCA1 mRNA表达水平的效果优于3.75mg/kg。.大黄素对泡沫细胞降低胞内胆固醇含量的效果高剂量14 μg/mL最优；对 ApoE-/-小鼠中剂量20 mg/k