从睾丸支持细胞ERK1/2-Cox7a2通路研究补肾益精法改善生精功能机理

中医学认为"肾藏精，主生殖"，"肾精"的盛衰决定着男子的生育能力；而睾丸支持细胞分泌产物调控生精细胞的分化、成熟，二者的相似性提示：从支持细胞分泌功能调控着手，可能是揭示补肾益精法改善生精功能机理的理想切入点。我们前期研究发现：生精功能损害通常会伴随支持细胞分泌功能及其相关调控信号通路（ERK1/2-Cox7a2通路）的变化，五子衍宗丸可通过改善支持细胞分泌功能，进而改善生精功能。本研究采用补肾益精代表方五子衍宗丸对肾精亏虚证生精障碍大鼠模型、原代培养大鼠支持细胞和TM4小鼠支持细胞系进行干预，通过细胞、分子生物学和血清药理学等方法观察ERK1/2-Cox7a2通路、支持细胞分泌产物及生精功能的变化。本研究对从支持细胞分泌功能调控层面揭示补肾益精法改善生精功能机理具有重要意义。

五子衍宗丸是补肾益精法治疗男性不育的代表方。目前补肾益精法改善生精功能机理研究主要集中在生精细胞。支持细胞被称为生精细胞的“保姆细胞”，其分泌产物参与生精细胞的分化成熟，保证精子发生的正常有序进行。该法如何通过改善支持细胞分泌功能而进一步改善生精功能还所知甚少。我们通过离体和在体实验观察了五子衍宗丸干预后支持细胞ERK1/2-Cox7a2通路、支持细胞分泌功能及生精功能变化。研究显示：（1）离体实验：构建大鼠及小鼠Cox7a2转染重组质粒，转染重组质粒后支持细胞分泌产物水平发生显著变化。雄激素结合蛋白(ABP)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6 (IL-6)水平显著升高，转铁蛋白(TF)、抑制素B (INHB)水平显著降低，而细胞色素C氧化酶（COX）活性降低， ERK1/2磷酸化水平显著升高。五子衍宗丸高浓度含药血清共孵育后，转染重组质粒后升高的ABP、IL-1β和IL-6水平显著降低，而降低的TF、INHB水平显著升高，细胞活力增加。表明五子衍宗丸含药血清对支持细胞分泌产物的改善作用与抑制Cox7a2的表达有关。（2）在体实验：通过构建的肾精亏虚证生精障碍大鼠发现：其支持细胞分泌产物表达发生显著变化。血清FSH水平显著升高，INHB、T水平显著下降，睾丸组织中ABP mRNA水平显著升高， TF表达显著下降， ERK磷酸化（pERK/ERK）水平和cox7a2mRNA水平显著升高，同时睾丸病理Johnsen评分显著下降。而五子衍宗丸干预后血清FSH水平降低、INHB、T含量增加、睾丸组织TF表达增加、ABP mRNA水平下降；Cox7a2mRNA表达和ERK磷酸化水平显著降低；睾丸Johnsen积分显著增高。本研究揭示了五子衍宗丸改善生精功能的机理与其改善支持细胞分泌功能和调控ERK1/2-Cox7a2通路有关。