糖皮质激素诱导蛋白GILZ调控Th9分化及其在器官移植排斥中的作用机制

Th9是新发现的一类CD4+T细胞亚群，在自身免疫性疾病中发挥重要作用，在移植排斥反应中的致病作用也出露端倪,但Th9参与排斥反应的机制尚不清楚。我们前期工作显示GILZ对辅助性T细胞（Th17及Treg）的分化和功能有重要的调控作用，然而，GILZ是否调控Th9分化和功能并参与排斥反应尚不清楚。因此，本课题拟建立并完善Th9培养体系，分析Th9表型包括GILZ表达和免疫学功能；研究高表达和缺陷表达GILZ对Th9活化、表型和功能的影响；观察高表达和缺陷表达GILZ的Th9回输后，Rag-2-/-小鼠DTH的变化；利用心脏移植模型，观察Rag-2-/-小鼠及野生型小鼠分别回输高表达和缺陷表达GILZ的Th9后，排斥的发生率及生存期的变化并分析相关机制，为进一步认识Th9在移植排斥发生和发展中的作用和机制提供实验数据。

本课题采用TGF-β+IL-4+ IL-9体系培养Th9细胞。在成功构建GILZ重组慢病毒载体并合成GILZ靶向性siRNA基础上，探讨了增强以及抑制GILZ表达对Th9细胞生物学特性及作用机制的影响。结果显示：高表达GILZ降低Th9细胞表面分子IL-17RB、IL-9R以及细胞分泌因子IL-9的表达，促进IL-10的分泌；抑制同种混合淋巴细胞的增殖能力，同时降低Th9细胞对同种抗原细胞毒性T淋巴细胞杀伤能力。GILZ能够在基因水平和蛋白水平来调控PU.1的表达，而对IRF4、STAT6的表达只是通过蛋白水平来调控，从而影响Th9细胞的分化发育。该研究为今后体内研究Th9细胞在移植排斥中的作用提供了科学依据。