阻断galectin-7/p38 MAPK通路诱导自身免疫性肝炎免疫耐受的机制研究

Autoimmune hepatitis is an inflammatory liver disorder mediated by immune response against self-antigens. Increase of the ratio of Treg/Th17 has been recognized as an important link in control of autoimmune hepatitis through the re-establishment of immune tolerance. IL-6 acts as a key immunomodulator in inducing differentiation of naive T cells to either Treg or Th17. The increase of IL-6 concentration can inhibit the differentiation of Treg and promote the differentiation of Th17. Our recent studies have shown that galectin-7 was up-regulated in hepatocytes of autoimmune hepatitis mice. Galectin-7 promotes the expression of IL-6 in hepatocytes via the p38 MAPK pathway. In this study, we use galectin-7/p38 MAPK pathway as a target. Blocking galectin-7/p38 MAPK pathway using galectin-7 gene targeting siRNA recombinant adeno-associated virus vector inhibits the expression of IL-6 in hepatocytes, which could restore immune tolerance through increase of the ratio of Treg/Th17. We further study the mechanism of the differentiation of Treg and Th17 regulated by galectin-7.This study is expected to provide the experiment support for the new strategy of the induction of immune tolerance in autoimmune hepatitis.

自身免疫性肝炎（AIH）是免疫系统对自身抗原失耐受所致的肝脏炎症性疾病。目前认为增加Treg/Th17比例可以通过重建免疫耐受从而控制AIH。IL-6在初始T细胞向Th17或Treg分化过程中起关键性调控作用，IL-6浓度的增加可以抑制Treg分化和促进Th17分化。本项目前期研究显示，galectin-7在AIH小鼠肝细胞中表达增加，且galectin-7通过p38 MAPK通路促进肝细胞表达IL-6。本研究以galectin-7/p38 MAPK通路为干预靶点：应用靶向galectin-7基因的小干扰RNA重组腺相关病毒载体，沉默AIH小鼠肝细胞galectin-7基因，阻断p38 MAPK通路，抑制肝细胞表达IL-6，增加Treg/Th17比例，从而重建免疫耐受；并探讨galectin-7调节Treg和Th17分化的机制。通过本研究，有望为探索诱导AIH免疫耐受的新策略提供实验依据。

一、Galectin-7促进CD4+ T 细胞增殖和Th1/Th2平衡向Th1细胞极化. 自身免疫性肝炎(AIH)是免疫系统对自身抗原失耐受所致的肝脏炎症性疾病。CD4+ T 细胞增殖和Th1/Th2平衡向Th1细胞极化是免疫耐受缺失的重要机制。Galectin-7与CD4+ T细胞反应有关；然而，其对CD4+ T细胞反应的影响和作用机制尚不清楚。. 活化的小鼠CD4+ T细胞与galectin-7共培养。流式提示galectin-7促进活化的CD4+ T细胞的增殖和Th1/Th2细胞的平衡向Th1极化，而对静息状态下的CD4+ T细胞没有类似的作用。Galectin-7上调活化的CD4+ T细胞IFN-γ和TNF-α的表达。此外，免疫荧光法和WB发现galectin-7促进活化CD4+ T细胞中Smad3从核内转移至胞内。. 结果提示galectin-7通过抑制TGFβ/Smad3通路促进活化的CD4+ T细胞增殖和Th1/Th2细胞的平衡向Th1极化。意味着galectin-7蛋白具有诱导自身免疫性疾病的潜在作用。本项目有望为探索诱导AIH免疫耐受的新策略提供实验依据。.二、IL-27在AIH中的作用及机制研究. Treg细胞可以通过重建免疫耐受从而控制AIH。IL-27具有免疫调节功能，通过促进免疫调节分子的表达增强Treg功能。我们前期发现，IL-27在AIH患者及AIH小鼠血清中的表达水平明显高于健康对照组。然而，IL-27在AIH中的作用及机制尚不清楚。. 建立ConA诱导的小鼠AIH模型，予以IL-27腺病毒处理。检测肝酶变化以及肝脏HE染色提示IL-27明显改善AIH小鼠肝脏损伤，然而IL-27对小鼠肝脾中Treg比例无明显影响。体外实验也发现IL-27对Treg比例无明显影响。IL-27预处理显著增强Treg对naïve T细胞增殖的抑制作用。较未处理的Treg，IL-27预处理的Treg回输AIH小鼠显著改善小鼠肝脏损伤。RT-PCR提示IL-27显著上调Treg细胞PD-1的表达，而阻断PD-1明显减弱IL-27预处理的Treg回输对AIH的保护作用。. IL-27可能通过上调免疫调节分子PD-1的表达，增强Treg细胞的抑制功能，进而抑制AIH的进展。为探索AIH的发病机制以及治疗方案提供新的思路。