基于“caveolin-p38MAPK”信号通路的补肾壮骨中药复方保护关节软骨机制的研究

骨性关节炎（OA）的主要病理变化是关节软骨的退变与破坏，保护关节软骨是OA防治的关键。鉴于关节软骨退变与破坏机制的错杂多样，针对其相关机制的多靶点综合调节已成为当前防治的主要取向。本项目组前期研究证实补肾壮骨中药复方壮骨健膝方具有确切防治OA的效果，能从软骨基质与细胞等多方面有效保护关节软骨，但其具体作用靶点尚不明确。caveolin-p38MAPK信号通路在OA发病中起重要作用，该通路的激活可多环节促进关节软骨退化，诱发或加重OA。本项目采用两种软骨细胞退变模型，借助对比及分段针对性阻断的研究方案，通过多方法检测caveolin-p38MAPK信号通路中的关键信号分子及其下游促分解性细胞因子、MMPs与软骨细胞凋亡等效应产物的变化，从而在一定程度阐明壮骨健膝方保护关节软骨的具体靶点与环节，为其防治OA奠定扎实基础，也为今后以该信号通路相关靶点筛查该方防治OA有效部位或成分的研究提供依据。

基于Caveolin-p38MAPK信号通路的补肾壮骨中药复方保护关节软骨机制的研究..中文摘要.骨关节炎（osteoarthritis，OA）的主要病理变化是关节软骨的退变与破坏，保护关节软骨是OA防治的关键。壮骨健膝方具有确切防治OA的效果，但其机制尚不明确。借助在关节软骨退变中起重要作用的caveolin-p38MAPK信号通路，本课题研究该方保护关节软骨的内在机制。.第一部分：制备新西兰兔的空白血清与壮骨健膝方含药血清；应用Ⅱ型胶原酶消化法获得生长快且稳定的软骨细胞，建立兔膝关节软骨细胞体外培养体系，并采用形态学观察、甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化进行鉴定；根据文献及预实验的结果以10 ng/ml IL-1β诱导软骨细胞退变，并对退变软骨细胞进行鉴定。第二部分：借助IL-1β诱导后兔软骨细胞体外培养体系，完成壮骨健膝方含药血清在不同时间点对退变软骨细胞中caveolin-p38MAPK信号通路相关靶点及其下游相关效应指标影响的观察，证实了经IL-1β诱导后兔软骨细胞中存在该信号通路的激活，明确壮骨健膝方可以通过下调该信号通路中caveolin-1、p-p38与p-ATF-2的蛋白表达，进而减少其下游效应产物IL-1β、TNF-α、MMP-3、13的产生并降低退变软骨细胞凋亡率达到保护关节软骨的效果，确定了该方干预该信号通路达到保护关节软骨的最佳时间点为48 h；完成了壮骨健膝方含药血清中部分组方药物成分的分析，获得药物成分之一柚皮苷，证实了柚皮苷保护退变关节软骨细胞的效应及机制与壮骨健膝方全方含药血清的作用相一致。第三部分：建立了人正常和人OA关节软骨细胞体外培养体系并进行鉴定；完成了壮骨健膝方含药血清对人OA退变软骨细胞中caveolin-p38MAPK信号通路相关靶点及其下游相关产物影响的观察，证实了壮骨健膝方保护人OA退变关节软骨细胞也与下调该信号通路caveolin-1、p-p38的蛋白表达，进而减少其下游效应产物TNF-α、IL-1β、MMP-3、13的产生及降低退变软骨细胞凋亡率有关。.总之，该课题通过caveolin-p38MAPK信号通路，揭示了壮骨健膝方保护退变关节软骨的相关靶点与环节，为该方防治OA提供进一步的实验依据，也为今后借助相关靶点筛查该方防治OA有效部位或成分的研究奠定了基础。