利用含结核特异CDR3保守序列的TCR筛选结核分枝杆菌T细胞表位的研究

结核仍是全球范围内感染率最高的传染病，研制新型诊断试剂和疫苗势在必行！抗结核免疫以特异性T细胞免疫为主，确定T细胞表位，对其诊断试剂开发、表位疫苗设计具有重要意义。项目前期建立检测完整TCR αβ双链CDR3谱型的基因扫描分析技术平台，根据结核菌标准株H37Rv和CDC1551全基因组序列，预测出1019个Th、689个CTL表位。在此基础上，拟：①检测200例潜伏感染者TCR CDR3谱型，找到结核特异TCR；②寻找结核特异CDR3保守序列，依据其V、J基因片段的取用，组装含保守序列的TCR；③从预测的表位中筛选能与所组装TCR高亲和力结合的表位；④体外实验鉴定Th1和CTL表位；⑤动物实验验证表位的免疫保护性。.项目利用含结核特异CDR3保守序列的TCR从结核菌全基因组中筛选表位，以期找到高度保守的结核免疫优势表位，为表位筛选提供新思路，为以表位为基础的结核诊断试剂和疫苗研制奠定基础。

课题组首次利用含结核特异CDR3保守序列的TCR从结核菌全基因组中筛选表位。①检测了200例结核潜伏感染者外周血T细胞TCR α、β双链CDR3谱型，找到CD4+、CD8+ T细胞结核特异TCR；②在TCR α、β双链中分别找到结核特异CDR3保守序列，依据V、J基因片段的取用，构建了含保守序列的TCR，体外实验鉴定了其抗结核活性；③对304名结核患者进行HLA-A、HLA-DR位点高分辨基因分型检测，证实频率最高的分别是HLA-A*1101、HLA-DRB1*0901，与HLA等位基因权威数据库中国人群的结果一致。④根据MTB标准株H37Rv全基因组序列，预测出1373个HLA-DRB1*0901限制性Th表位、553个HLA-A*1101限制性CTL表位。⑤从预测的表位中筛选出与所构建TCR高亲和力结核的表位，体外刺激结核患者外周血T细胞，发现6个HLA-A*1101限制性CTL表位可诱导患者CD8+ T细胞增殖、特异性分泌IFN-γ，其中表位Rv3130c194-204诱导出多功能CD8+ T细胞，肽多聚体检测结果显示，HLA-A*1101型结核患者PBMC中肽特异性CD8+ T细胞达0.718%；3个HLA-DRB1*0901限制性Th1表位可诱导患者CD4+ T细胞增殖、特异性分泌Th1型细胞因子IFN-γ和TNF-α。项目为表位筛选提供新思路，也为以表位为基础的结核诊断试剂开发、表位疫苗设计奠定基础。