金纳米棒结合反义寡核苷酸适配子在隐球菌性脑膜脑炎诊断及治疗中的实验研究

Cryptococcal meningitis is often misdiagnosed or diagnosed not in time, because the diagnosis depends on clinical symptoms and fungal dtermination of CSF at present. On the other hand,there is no specificity in iconography, so that it is important to find out a new method for early diagnosis, follow up,and treatment.. On this aim, we will develop a targeted probe combined with antisense oligonucleotide of cryptococcus neoformans CAP59 gene and gold nanorods to study the targeting specificity in vitro. Then mice model of cryptococcal meningitis will be set up, and the charateristics in CT imaging will be analysed after the targeted probe injecting into the tail vein. The feasibility for atromatic diagnosis of cryptococcal meningitis will be validated in our study, after which the targed treatment based on photothermy of gold nanorods is performed and observed to explore a new way for cryptococcal meningtis therapy.

隐球菌性脑膜脑炎的确诊目前主要依靠临床症状结合脑脊液的真菌学检查，极易造成漏诊、误诊或诊断不及时，另外，由于隐球菌感染的影像学特异性不强，现有的检测方法很难对病变准确定位，致病菌在脑部的具体侵袭部位一直是困扰临床医生的难题，因此，探索一种新的检测方法对于隐脑的早期诊断、检测病情变化、病灶定位以及治疗都具有重要意义。.本研究立足于临床实际，利用金纳米棒能够自发荧光的特性，设计制备结合新生隐球菌CAP59反义寡核苷酸适配子的金纳米棒探针（GNRs），通过改变长径比等参数优化制备工艺，体外研究其对隐球菌的靶向结合特异性，进而建立隐球菌脑膜脑炎的小鼠模型，观察靶向GNRs探针进入小鼠血液循环后在CT下的成像情况，验证其用于隐球菌性脑膜脑炎无创性诊断的可行性，并利用其特有的光热作用，为隐脑的治疗探索新的思路。

隐球菌病是一种严重的深部真菌病，感染通常侵犯中枢神经系统，隐球菌性脑膜脑炎在临床上往往缺乏特异性表现，造成患者很难得到早期诊断和及时治疗。而对于隐球菌的治疗，目前广泛使用的系统抗真菌药，有的无法通过血脑屏障，有的副作用较大，还有的隐球菌已经耐药。因此，探索一种新的检测方法对于隐脑的早期诊断、病灶定位以及治疗都具有重要意义。本次研究就尝试将目前广泛应用于影像学检测及光热治疗学的金纳米棒应用与隐球菌的影像学诊断与治疗。.本次研究主要包括以下主要的研究内容.体外研究.1．合成金纳米棒及与隐球菌抗体连接的靶向性金纳米棒，并对合成的物质进行物理学及化学的表征。.2．不同浓度的金纳米棒溶液进行CT扫描，明确金纳米棒作为CT造影剂的可行性。.3．新生隐球菌体外与靶向性金纳米棒特异性结合，并表征证实特异性结合成功。.4．体外检测新生儿隐球菌被靶向性金纳米棒标记后在CT下的影像学改变。.5．新生儿隐球菌与靶向性金纳米棒结合后接受近红外照射，观察隐球菌细胞的活性变化；.动物模型研究.6．建立隐球菌感染小鼠模型；.7．将靶向性金纳米棒作为造影剂注射入小鼠体内，对小鼠进行CT扫描，获得相应的影像学资料和结果。.本次研究中获得的主要研究结果如下：.1. 成功制备金纳米棒及将隐球菌荚膜抗体与金纳米棒偶联，制备成靶向性金纳米棒；实验结果也证实我们制备的靶向性金纳米棒能在体外与隐球菌细胞特异性结合。.2. 体外CT扫描以后我们证实，金纳米棒的X线衰减系数随着浓度增加而增加，与金纳米棒结合的隐球菌细胞的X线衰减系数也得到了明显的提高。.3. 体外我们进行了光热实验，实验结果显示与靶向性金纳米棒结合后的隐球菌，再接受近红外光的照射，隐球菌细胞活性明显下降，且我们体外细菌接种实验也进一步证实..4. 我们成功的建立了小鼠隐球菌感染的模型。并将我们获得的靶向性金纳米棒注射入小鼠体内。我们的研究结果显示，肺部小鼠的隐球菌感染灶的CT值较对照组升高，其次我们发现金纳米棒作为造影剂在体内的循环时间明显比传统的碘造影剂长。.由我们获得的实验结果我们可以获得以下几点：.1．靶向性金纳米棒可作为隐球菌感染的CT扫描造影剂；可以增强隐球菌感染灶在CT下的影像学表现，有利于临床早期发现和诊断。.2．靶向性金纳米棒可以增强近红外光热治疗对隐球菌的杀伤力，作为目前比较新颖的物理治疗方式，这将为我们今后研究提供基础。