基于DPC4的蝙蝠葛酚性碱抗胰腺癌分子调控机制研究

胰腺癌是一种恶性程度很高的肿瘤。从中药中寻找多靶点、多效应、毒副作用小的胰腺癌治疗药物是一种有效途径。前期工作证实，蝙蝠葛酚性碱对人胰腺癌细胞株BxPC-3裸鼠移植瘤具有抑制作用，并上调DPC4的表达。由此推测：蝙蝠葛酚性碱是通过上调DPC4的表达抑制胰腺癌。本研究拟采用RNA干扰技术建立稳定的DPC4沉默表达BxPC-3细胞株，并构建胰腺癌细胞和裸鼠移植瘤模型，以蝙蝠葛酚性碱干预，从体内和体外分别观察蝙蝠葛酚性碱对其生长增殖、转移和侵袭等特性的影响，并采用实时定量PCR和Western blot技术检测DPC4的表达，探讨蝙蝠葛酚性碱抗胰腺癌作用与DPC4表达的相关性；以基因芯片结合生物信息学技术，明确蝙蝠葛酚性碱抗胰腺癌作用中DPC4调控的下游靶基因和信号通路，阐明DPC4在蝙蝠葛酚性碱抗胰腺癌中的调控机制。本研究将明确蝙蝠葛酚性碱抗胰腺癌的作用靶点，并为研发抗胰腺癌中药新药奠定基础。

胰腺癌是一种恶性程度很高的肿瘤。从中药中寻找多靶点、多效应、毒副作用小的胰腺癌治疗药物是一种有效途径。前期工作结果表明，PAMD对胰腺癌细胞株BxPC-3裸鼠移植瘤表现出明显抑制作用，并且可影响细胞凋亡、细胞增殖和侵袭转移相关基因和细胞因子（包括DPC4）的表达。为探讨蝙蝠葛酚性碱抗胰腺癌的分子调控机制进行如下研究：.一、为明确PAMD对胰腺癌的抑制作用，建立胰腺癌细胞和裸鼠移植瘤模型，以PAMD进行干预，测定BxPC-3细胞生长周期并绘制生长曲线；MTT法检测各组中BxPC-3细胞的增殖情况；比较各组瘤重和抑瘤率，电镜观察病理形态；流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况。结果表明，PAMD对胰腺癌具有较强的抑制作用，并可明显促进BxPC-3细胞的凋亡，并将细胞阻滞在G1期，进而阻止细胞DNA复制。.二、为探讨PAMD抑制胰腺癌作用与DPC4表达的相关性，利用RNA干扰技术成功建立DPC4沉默表达的BxPC-3细胞株，并建立胰腺癌细胞和裸鼠移植瘤模型，以 PAMD进行干预，测定BxPC-3细胞生长周期并绘制生长曲线；MTT法检测各组中BxPC-3细胞的增殖情况；比较各组裸鼠移植瘤的瘤重，光镜观察裸鼠移植瘤的病理形态；流式细胞术检测BxPC-3细胞和裸鼠移植瘤的细胞周期及细胞凋亡情况。结果表明，PAMD抑制胰腺癌作用与DPC4表达有关，PAMD抗胰腺癌作用的有效靶点之一为DPC4基因。.三、以BxPC-3细胞为研究对象，以 PAMD进行干预，以基因芯片技术结合生物信息学技术检测，结果表明PAMD能改变BxPC-3细胞多个基因的表达,并能显著影响多个与肿瘤生长、凋亡和免疫相关的信号通路。. 四、分别建立胰腺癌细胞和裸鼠移植瘤模型，以 PAMD进行干预，采用实时定量PCR和Western blot技术检测ERK信号通路和Hedgehog信号通路中关键基因和蛋白的表达水平。结果表明PAMD能够下调胰腺癌BxPC-3裸鼠移植瘤中Shh、Ptch1、Smo、Gli-1、Raf、MEK1、ERK1 mRNA及蛋白的表达，其抗胰腺癌的作用机制可能ERK通路和Hh信号通路有关。. 本研究将明确蝙蝠葛酚性碱抗胰腺癌的作用靶点，并为研发抗胰腺癌中药新药奠定基础。