中药预适应诱导心肌延迟保护效应及机制研究

通过在体可逆性结扎冠状动脉左前降支，建立心肌缺血/再灌注损伤、缺血预适应的心肌延迟保护动物模型，利用体外培养细胞(心脏微血管内皮细胞、心肌细胞)技术, 建立缺氧/复氧损伤、缺氧预适应的心肌延迟保护细胞模型，以芪参益气滴丸进行药物预适应,观察中药预适应诱导的心肌延迟保护效应, 并针对涉及预适应保护信号转导机制的三个环节,分别以其特异性阻断剂为工具药,探讨中药预适应所致心肌延迟保护的分子生物学机制。从无创性激活机体内源性保护机制的角度,阐明芪参益气滴丸防治冠心病原理。为临床提供较理想的心肌保护提供技术平台和奠定理论基础。

预适应机制是目前已知最强大的内源性保护机制。基于心肌缺血预适应机制，建立相关模型，以芪参益气滴丸为干预药，研究了中药药理性预适应对心肌的DP效应。借助iNOS抑制剂SMT、PKC抑制剂CHE、CGRP阻断剂CGRP8-37及CAP、KATP通道阻滞剂GL、抗氧化剂NAC，通过对内源性保护物质蛋白含量及mRNA表达的测定，从分子生物学水平揭示QS药理性预适应作用机制，阐明激发机体内源性保护释放是中医药防治疾病的重要原理。 .实验结果：⑴QS预适应后CMC、CMEC的细胞活力好、损伤少，表现出与HPC效果相似的DP效应；在CMC、CMEC中应用阻断剂可以消除HPC的DP效应，而QS预处理可以拮抗这种阻断作用，表现为细胞活力提高、细胞损伤降低；在取消HPC的DP效应前提下，经过QS预适应的CMC和CMEC培养液中iNOS、CGRP、PKC、HSP70蛋白含量上升、Mn-SOD下降，细胞内CGRP、PKC、HSP70、Mn-SOD、iNOS的mRNA表达均升高；经过QS预适应的CMC和CMEC的ETARmRNA及蛋白含量下降。⑵QS预适应能够显著改善I/R所致大鼠心电图ST段抬高、减少梗死性Q波，提高大鼠I/R期间的心率，降低室性心律失常的发生率及程度，减小心梗面积，减轻病理损伤，改善左心室功能，降低血清心肌酶AST、LDH、及CK的活性，升高血清SOD活性、降低MDA的水平；经QS预适应，大鼠血清CGRP、iNOS、Mn-SOD蛋白含量升高，ETRA含量降低，免疫组化染色显示心肌组织内CGRP、PKC、HSP-70、iNOS的阳性细胞表达率升高，心肌组织中CGRP、PKC、HSP70、iNOS、Mn-SOD的mRNA表达升高；在应用特异性阻断剂或抑制剂消除DP效应前提下，经QS预适应的大鼠CGRP、iNOS、PKC、Mn-SOD、HSP70血清中蛋白含量升高，心肌组织中mRNA表达升高。以上结果均有统计学差异（P<0.01或P<0.05）。结论：⑴QS预适应可诱导心肌产类似缺氧预适应的DP效应。⑵QS在预适应机制触发物质、中介物质、效应器三个环节中，激发了内源性物质iNOS、CGRP、PKC 、Mn-SOD、HSP-70，激活KATP通道，使心肌产生DP效应，提示QS预适应或可通过多途径、多靶点激发心肌内源性保护作用。⑶本课题培养1名博士，6名硕士，发表论文4篇