MiR-200a/ZEB通路参与肝癌干细胞的产生和转移的机制研究

肝癌干细胞是肝癌发生和转移的种子，调控这些干细胞产生的分子机制尚不清楚,近年发现的EMT过程是其中的一个突破口。EMT即上皮类型向间充质类型转化过程，能赋予肿瘤细胞以干细胞特性。肝癌干细胞是否来自于发生了EMT过程的肝癌细胞，尚不明确。我们利用建立的肝癌干细胞亚群（SP细胞）分离方法，获取了SP细胞的失调microRNA表达谱。在众多microRNAs中，我们发现miR-200a下调幅度最大。有趣的是，miR-200a的靶基因ZEB等已被证实对EMT过程发挥决定性作用。那么，miR-200a在SP细胞中显著下调是否促进肝癌细胞发生EMT过程进而成为肝癌干细胞，仍待探究。我们拟在SP细胞中通过调节miR-200a和下游分子ZEB的表达水平，观察其对SP细胞的干细胞特性影响，以及对EMT过程的贡献，进一步明确miR-200a-ZEB通路调控作用的分子机制，最终为肝癌的防治提供新思路。

近年来，微小RNA被证明与肿瘤的远处转移相关。尽管microRNA-200a （miR-200a）在人类很多的肿瘤中表达为下调状态，但miR-200a在肿瘤边缘群细胞（ side population ），即一群具有肿瘤干细胞特性的亚群细胞中的表达未被检测过。在本研究中，本课题组通过收集我科室手术切除的101对肝癌组织和其相对应的癌旁组织，检测miR-200a在该组织中的表达，并与该患者临床病理进行统计分析。同时，通过流式细胞分选仪，利用紫外激光识别，分选出肝癌细胞系中边缘群细胞，并在体外以及体内进行相关实验，证实是否与侵袭转移相关。miR-200a的下游靶基因甚多，实验筛选出包括锌指蛋白ZEB在内的可能靶基因进行验证，证明ZEB相关功能。实验结果表明，miR-200a在肝癌组织中以及肝癌边缘群细胞中为低表达，并与远处转移相关。miR-200a在体外以及体内可以抑制肝癌边缘群细胞的侵袭转移。通过上调SP细胞中miR-200a的表达，发现与转移相关的标志物发生变化，并且抑制了ZEB2的表达。该实验通过将miR-200a、SP细胞以及ZEB2联系起来，探索其在肝癌中的机制。因此，本实验证实miR-200a通过ZEB2继而影响SP细胞的侵袭转移。