EphrinB2/EphB4诱导肿瘤相关巨噬细胞调节急性髓系白血病侵袭机制的研究

Tumor associated macrophages (TAM) initiated regulation tumor invasion by mediation tumor microenvironment is the focus nowadays. Our previous study found that tyrosine kinase EphrinB2/EphB4 signal initiated interaction of TAM and acute myeloid leukemia (AML), which played an key role on acute myeloid leukemia invasiveness. Thus a hypothesis about how EphrinB2/EphB4 signal initiated TAM regulating invasion of AML was proposed: Activation of EphrinB2/EphB4 induced TAM remodeling hematopoietic stem cell (HSC) niches which would promote the invasion of acute myeloid leukemia, furthermore, the signaling pathway RhoA/Rac1/MMps were activated, causing leukemia cell cytoskeleton and angiogenesis , leading acute myeloid leukemia invasiveness and metastasis. Cell co-culture, Ephrin-Eph interaction tests , RNA interference and transwell invasion assay were used in primary leukemia cells，cell lines and animal models in vivo and in vitro respectively to validate the hypothesis. The results of this study will help to find new targets for the treatment of acute myeloid leukemia with extramedullary infiltration，but also conducive to further solve the problems at present of recurrent, refractory leukemia。

肿瘤相关巨噬细胞（TAM）介导微环境改变，调节肿瘤侵袭性是目前研究热点，我们前期研究发现酪氨酸激酶EphrinB2/EphB4信号启动TAM与急性髓系白血病（AML）细胞相互作用，是调节急性髓系白血病侵袭性的关键分子，从而推测出EphrinB2/EphB4诱导TAM调节AML侵袭机制的假说：TAM与AML细胞表面EphrinB2/EphB4信号的活化一方面能诱导TAM重塑骨髓造血微环境，为急性髓系白血病侵袭提供条件；另一方面能活化RhoA/Rac1/MMps，促进白血病细胞骨架改变、血管生成，从而直接促进急性髓系白血病细胞侵袭转移。我们利用急性髓系白血病原代细胞、细胞株和动物模型，通过细胞共培养、Ephrin-Eph配受体刺激实验、RNA干扰、Transwell侵袭实验等从体内外证实这一假说。这将为急性髓系白血病髓外浸润的治疗提供新的靶点，有利于解决急性髓系白血病难治、复发的难题。

近年来髓系白血病的治疗虽然有了较大进步，但髓外浸润、复发难治仍是临床上亟待解决的问题。很多情况下常规化疗药物无法解决患者难题，更多的分子靶点、分子靶向药的发现将是我们努力的方向。本研究分别利用急性髓系白血病骨髓原代细胞、细胞株和动物模型，通过细胞共培养、免疫印迹、RNA干扰、Transwell 侵袭实验等技术证实EphrinB2/EphB4信号在肿瘤相关巨噬细胞（TAM)与急性髓系白血病（AML）相互作用下调节急性髓系白血病侵袭性的核心机制：TAM与急性髓系白血病细胞表面EphrinB2/EphB4信号的活化一方面能诱导TAM分泌CXCL-4、TGFβ1、VEGF重塑骨髓造血微环境，从而促进白血病细胞增殖并维持其干细胞特性，为急性髓系白血病细胞侵袭提供条件；另一方面，EphrinB2/EphB4信号的活化，活化RhoA/Rac1/MMps，促进白血病细胞骨架改变、血管生成，从而直接促进急性髓系白血病细胞侵袭转移，为急性髓系白血病髓外浸润的治疗提供新的靶点和实验依据。更进一步的是，我们利用髓系白血病与间充质干细胞（MSC）共培养技术证实EphrinB2/EphB4活化能重塑造血微环境“Nich”其他机制--EphrinB2/EphB4 可以调节骨髓间充质干细胞向成骨分化，促进AML增殖、迁移从而介导AML侵袭机制。另外，基于深度测序及组学研究显示酪氨酸激酶抑制剂耐药或不耐受的慢性粒细胞白血病患者的癌症相关基因突变具有相应特征性，糖酵解/糖异生途径异常参与CML耐药机制。我们的研究将为白血病髓外浸润行为寻找更有效的靶标提供新的思路，同时有利于进一步解决目前髓系白血病难治、复发的难题，具有重大的理论意义和实际应用价值。