茶树花多糖的免疫和抗肿瘤活性及其构-效关系的研究

China produces a plenty of tea each year, accordingly, there is a rich resource of tea flower. Polysaccharides have been demonstrated to exhibit a variety of physiological functions, such as anti-aging, immune regulation and anti-tumor activity. However, only a few, but not systemic studies on polysaccharides from tea flower (TFPS) are available. Based on our previous studies, the objectives of this project are to investigate the immunostimulatory and anti-tumor activities of TFPS and stuy the relationship between its structure and bioactivity. The main contents of this project are as following: (1) To develop efficient procedures for the extraction, separation and purification of TFPS; (2) to screen the fractions of TFPS that have the immunostimulatory and anti-tumor activities by in vitro assays, further, to test their bioactivities by using corresponding in vivo animal models, in order to get the immunostimulatory and anti-tumor activities of TFPS clear; (3) To characterize the structure of TFPS by using methods of UV, Smith degradation and etc.; (4) To analyze the solution behaviors of TFPS, such as intrinsic viscosity, particle size distribution, optical rotation and etc. by using nano-particle size analytical instrument; to investigate the molecular chain conformation of TFPS by using atomic force microscope and polygonal laser light scattering instrument. Finally, to elucidate the relationship between the structure and activity of TFPS based on the results obtained.

我国是茶叶生产大国，拥有丰富的茶树花资源。多糖具有抗衰老、免疫调节与抗肿瘤等多样的生理功能，但目前国内外对茶树花多糖的研究报道较少，且缺乏系统性。基于我们良好的前期研究基础，本项目拟研究茶树花多糖的免疫与抗肿瘤活性及其结构与活性的关系，具有重要的理论意义。主要研究内容如下：（1）建立茶树花活性多糖提取、分离与纯化的方法；（2）通过细胞培养等技术筛选具有免疫活性和抗肿瘤活性的茶树花活性多糖，并在此基础上进行相应的免疫与抗肿瘤的动物体内实验研究，明确茶树花活性多糖的免疫调节与抗肿瘤活性；（3）采用UV、Smith降解等方法对茶树花活性多糖进行结构表征；（4）利用纳米粒度仪等分析多糖溶液的特性粘度、粒度分布、比旋光度等茶树花多糖的溶液行为，利用原子力显微镜、动态光散射仪等分析茶树花多糖的分子链构象，以阐明茶树花多糖的活性与结构的关系。

近年来国内外研究表明，茶树花的成分与茶叶相似，含有多种有效生化成分，具有多种生理功能，但对此的研究还不够系统全面。本项目主要研究了茶树花多糖的最优提取条件，分离纯化得到了茶树花多糖纯品，对其理化性质、结构进行了分析，研究了其免疫与抗肿瘤活性。通过生物活性评价，筛选出高活性的茶树多糖组分, 解析了其化学结构，初步明确了茶树花多糖的结构与生物活性之间的关系。.1、茶树花多糖提取和纯化 .选取提取温度、提取时间和液料比进行单因素实验，在此基础上设计三因素五水平的CCD实验，利用Design-Expert软件处理，并结合实际操作性，得到茶树花多糖的最佳提取条件: 提取温度96 ℃，提取时间 230 min，液料比25 mL/g。在此条件下的茶树花多糖实际得率为13.43±3.17%，基本与预测值一致。.茶树花多糖提取液经过0.1 μm的超滤膜系统，获得截留液TFPS-1和透过液TFPS-2两个组分。将茶树花粗多糖的截留液和透过液分别经DEAE-纤维素-52离子交换柱和葡聚糖凝胶G-100分离纯化后，共得到六个单一组分，组分TFPS-1-1量较少，忽略不研究，其余五个组分（TFPS-1-2、TFPS-1-3、TFPS-2-1、TFPS-2-2、TFPS-2-3）的得率分别为19.62%、35.86%、13.75%、18.55%、30.28%。.2、茶树花多糖的结构分析.将茶树花多糖的五个纯化组分利用高效液相色谱检测其纯度和相对分子量，结果表明，五个组分均为单一组分，分子量分别是215.419 kD，142.731 kD，3.716 kD，2.518 kD，2.087 kD。通过多种分析方法对多糖组分的化学组成进行了测定，结果表明各多糖组分分别具有不同的中性糖和硫酸基含量；采用原子力显微镜观察多糖形态，结果显示五个组分均是多个糖链的聚集体。经红外光谱、甲基化和核磁分析推测TFPS-1-3组分的一级结构如图，其中n约为211。.3、茶树花多糖的体外免疫活性及抗肿瘤活性.采用体外细胞实验研究了茶树花多糖的组分对小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7的增值作用、酸性磷酸酶活性、对巨噬细胞激活后相关细胞因子释放量的影响。结果表明茶花多糖各组分均能促进细胞增殖；促进细胞酸性磷酸酶活性；与巨噬细胞的相互作用研究表明各组分能有效提高巨噬细胞吞噬中性红的能力，并增加巨噬细胞免疫效应分