Nephrin磷酸化在PIP复合物介导足细胞黏附改变中的作用及分子机制

足细胞在损伤状态下伴随着足突融合和足细胞从肾小球基底膜剥脱，足细胞裂孔膜蛋白nephrin表达和/或磷酸化通常与足细胞损伤密相关。黏着斑蛋白PINCH1-ILK-α-parvin（PIP）异三聚体是形成基底膜黏着斑的主要分子，是调控细胞黏附的重要分子平台。Nephrin磷酸化介导的下游信号是否通过PIP导致足突黏附改变，目前尚不清楚。本课题旨在通过嘌呤霉素肾病（PAN）模型和培养的小鼠足细胞，观察nephrin磷酸化水平，PIP复合物间的组成、异构体转化及足细胞骨架及黏附改变，并通过抑制PIP形成，调节nephrin磷酸化水平，探讨nephrin是否通过影响PIP的形成及其下游事件，改变足细胞正常的结构和功能，导致足细胞剥脱。本课题研究将揭示足细胞在病理过程中足突融合剥脱的分子机制，为寻求有效途径防治足细胞损伤提供新的理论依据。

足细胞在损伤状态下伴随着足突融合和足细胞从肾小球基底膜剥脱，足细胞裂孔膜蛋白nephrin表达和/或磷酸化通常与足细胞损伤密相关。黏着斑蛋白PINCH1-ILK-α-parvin（PIP）异三聚体是形成基底膜黏着斑的主要分子，是调控细胞黏附的重要分子平台。Nephrin磷酸化介导的下游信号是否通过PIP导致足突黏附改变，目前尚不清楚。本课题旨在通过嘌呤霉素肾病（PAN）模型和培养的小鼠足细胞，观察nephrin磷酸化水平，PIP复合物间的组成、足细胞骨架及黏附改变，并通过抑制PIP形成，调节nephrin磷酸化水平，探讨nephrin是否通过影响PIP的形成及其下游事件，改变足细胞正常的结构和功能，导致足细胞剥脱。实验结果提示nephrin/磷酸化nephrin及PIP复合物在足细胞中均有表达，且在嘌呤霉素刺激下，nephrin磷酸化水平下降，PINCH-1-ILK-α-parvin（PIP）复合物表达降低，足细胞粘附能力和伸展性下降。在嘌呤霉素刺激下，抑制nephrin磷酸化水平，PIP复合物表达减少，足细胞细胞骨架发生紊乱、重组，足细胞粘附、足突伸展能力下降。且磷酸化nephrin过表达，可使PIP复合物表达减少，同样引起足细胞骨架改变，足细胞粘附及伸展能力降低。由此我们得出结论：足细胞在损伤状态下，nephrin磷酸化信号影响足细胞骨架改变以及足细胞粘附功能，且磷酸化nephrin可能是通过调节PIP复合物引起足细胞骨架改变及粘附异常，从而改变足突与基底膜的粘附能力，导致足细胞剥脱。