肺泡上皮细胞CFTR和TMEM16A功能状态对急性肺损伤大鼠肺水清除作用研究

肺内炎症反应与肺水清除障碍是急性肺损伤（ALI）主要病理生理改变。离子通道与肺水清除的关系备受关注，CFTR和TMEM16A均为氯离子通道，可能是调节肺水清除的重要途径之一。糖皮质激素（GCs）是ALI抗炎药物，但效果个体差异很大；其对肺水调节机理有待研究。本课题通过建立肺内源性（Ecoli气管内滴入）与肺外源性（LPS尾静脉注射）ALI模型，在体测定肺水清除率；分离、纯化肺泡Ⅱ型上皮细胞（ATⅡ），比较不同原因ALI中ATⅡ上CFTR 与TMEM16A RNA及蛋白表达水平的差异；利用膜片钳技术结合通道阻滞剂与相应siRNA干预，观察ATⅡCFTR和TMEM16A的功能状态及其与肺水清除的关系；同时在动物与细胞水平观察GC干预效果的差异，以探讨GCs对CFTR与TMEM16A的影响。旨在探寻改变ALI/ARDS肺水清除新途径，为进一步研究GCs治疗适应证奠定理论基础。

从检测 TMEM16A在大鼠正常肺泡上皮细胞中的表达入手， 探讨了TMEM16A在肺泡上皮细胞急性炎症反应中的表达变化及对急性炎症反应的调控作用。在本研究中证明了TMEM16A 表达于大鼠正常肺泡上皮细胞，并以人II型肺泡上皮细胞永生细胞系A549 为对象，揭示了在革兰氏阴性菌内毒素LPS刺激下，TMEM16A表达水平的变化，发现在LPS刺激后，TMEM16A蛋白表达先上调后下降；成功构建了含TMEM16A 全长cDNA的真核表达载体，并转入A 549使其过表达TMEM16A， 同时使用慢病毒介导RNA干扰TMEM16A表达，使A549细胞低表达TMEM16A，对比研究了在LPS刺激下，TMEM16A对 A549细胞急性炎症反应的调控作用，发现TMEM16A可以抑制LPS引起的A549 细胞中炎性细胞因子释放的增多，并发现TMEM16A可以抑制LPS引起的A549 细胞凋亡增多。TMEM16A可能从1.炎症反应2.细胞凋亡3.肺水转运等三方面参与急性肺损伤，对急性肺损伤有保护作用，但具体经何途径起如上作用仍需进一步的研究。因此，通过对TMEM16A 更加深入的研究，会有助于更深入地了解ALI机制，并可能为治疗这类疾病提供新的思路。