西藏地区耐多药(MDR)及广泛耐药(XDR)结核分枝杆菌耐药性及其基因分型研究

耐药结核病的出现给结核病防控带来了严重挑战。由于高原高寒、经济发展落后及居民文化素质较低等原因，目前西藏地区结核病疫情流行仍十分严重，结核分枝杆菌总耐药水平及耐多药率均明显高于国内其他地区，结核病是西藏地区因病致贫、因病返贫的主要疾病之一。另外，西藏地处边疆，政治社会氛围复杂，社会稳定形势严峻，严重的结核病疫情必将导致社会不稳定因素的增加。因此，开展西藏地区结核分枝杆菌耐药性调查与研究，为西藏地区结核病防控提供指导依据具有重要的意义。本研究拟采集复发及复治失败肺结核患者痰液标本进行结核分枝杆菌分离鉴定及药敏实验，以了解西藏地区该菌的耐药现况及耐药特征；对所获MDR及XDR菌株采用PCR-SSCP及直接测序法检测其相关耐药基因，探讨其主要分子耐药机制；采用MLVA法对所获菌株进行基因分型，分析西藏地区MDR及XDR结核分枝杆菌分子流行病学特征，从而为西藏地区科学有效地防控结核病提供指导依据。

研究背景及意义：耐药结核病的出现给结核病防控带来了严重挑战。由于高原高寒、经济发展落后及居民文化素质较低等原因，西藏地区结核病疫情流行一直十分严重。由于种种原因，西藏地区结核分枝杆菌的耐药研究资料很少。本研究对分离所获西藏地区MTB临床菌株检测耐药表型、检测其相关耐药基因以及对所获MDR/XDR-MTB菌株进行基因分型，以了解西藏地区MTB的耐药现况、MDR/XDR-MTB耐药基因突变分子特征等，从而为西藏地区科学有效地防控结核病提供指导依据。.主要进展：. 1.本项目开展共采集各类肺结核患者痰标本2689份，获得抗酸阳性菌株865株，经PNB、TCH生长试验初步鉴定并真空冷冻干燥保存MTB菌株819株。. 2.所获菌株对抗一、二线抗结核药物耐药表型检测结果显示，西藏地区临床MTB菌株总体耐药率、耐多药率以及复治总耐药率分别为56.41%、30.77%和83.15%，明显高于全国平均水平。对四种一线抗结核药物的耐药率普遍高于国内其他地区的报道，尤其是在复治患者中，异烟肼和利福平分别达71.91%和75.28%。对四种一线抗结核药物任何耐药的高到低顺次为异烟肼、链霉素、利福平、乙胺丁醇。对二线抗结核药物耐药检测结果显示耐药率低于国内多数地区的报道，在252株MDR-MTB菌株中检测到23株泛耐药（XDR）菌株，占比9.13%，也高于全国水平。. 3.所获MTB菌株PCR-SSCP--测序检测相关耐药基因突变结果显示，各常见耐药相关基因突变位点大致与国内其他地区的检测结果一致，但突变位点较为集中于常见的突变热点，其他位点相对较为少见。另外，双位点突变所占比例比国内其他地区为高。本研究在异烟肼相关耐药KatG基因发现了二个未见报道过的新的突变位点（3株304密码子TAT→TCT和2株344密码子ACG→CCG的单位点突变）。另外，在315密码子发现非常少见的AGC→ACA的双突变3株。. 4.所获MDR/XDR-MTB菌株15-位点MLVA基因分型结果显示，150株耐多药和泛耐药菌株中有99株属于分型基因群I，占比达66%，且16株XDR菌株中的9株也属于该群，说明西藏地区临床耐多药MTB菌株在人群中广泛传播流行的可能存在，结核病防控形势不容乐观。