基于miR-200/Keap1/Nrf2通路探讨黄芪当归药对改善特发性肺纤维化氧化应激的机制与临床干预研究

IPF is characterized by Coarse mesh changes with honeycomb lung formation. In recent years, the incidence of IPF has increased significantly, which become a serious risk to human health. Combined with the previous research and the latest research progress, we hypothesized that Huagnqi and Danggui may regulate the oxidative stress level of IPF by miR-200/Keap1/Nrf2 pathway. . This project using IPF rat model induced by bleomycin as the subject, Huagnqi and Danggui as the treatment method, QRT-PCR, Western Blot, immunohistochemistry, ELISA as the biological techniques to observe the pathological structure of lung tissue, test the expression of miR-200, Keap1, Nrf2, ARE, HO-1, γ-GCS, NQO1. In order to analyze the mechanism of the miR-200/Keap1/Nrf2 pathway in the formation of IPF. Meanwhile to observe the change when using Keap1 inhibitor. In the clinical intervention study, we observe the effect of Huagnqi and Danggui on the changes of quality of life and symptom on patients. We also observe the changes of six-minute walking test, HRCT, pulmonary function and so on. So that we can expound the mechanism of the effect of Huagnqi and Danggui on IPF and reveal the basis of pesticide effect and the action target.

特发性肺纤维化以粗大网织样改变伴蜂窝肺形成为主要变化，发病率高、危害性大。结合前期研究和最新研究进展，提出工作假说：芪归药对可能通过miR-200/Keap1/Nrf2通路，调节IPF氧化应激水平，从而发挥治疗作用。. 本项目以博来霉素诱导的IPF大鼠模型为研究对象，以芪归药对为治疗手段，采用QRT-PCR、Western Blot、免疫组织化学、ELISA等生物学技术，观察肺组织病理变化，检测关键分子miR-200、Keap1、Nrf2基因和蛋白表达，以及下游靶点ARE、HO-1、γ-GCS、NQO1，分析该通路在IPF形成过程中的机制。研究用Keap1拮抗剂后上述效应的改变。并观察芪归药对对IPF患者生存质量和症状的改善，以六分钟步行试验、HRCT、肺功能等为疗效评价。以期阐明芪归药对治疗IPF作用机制，揭示其治疗药效物质基础和作用靶点，为防治IPF提供一个新的思路和方法。

特发性肺纤维化以粗大网织样改变伴蜂窝肺形成为主要变化，发病率高、危害性大。结合前期研究和最新研究进展，本项目分为三部分进行研究。第一部分研究以博来霉素诱导的IPF大鼠模型为研究对象，以芪归药对为治疗手段，采用QRT-PCR、Western Blot、免疫组织化学等生物学技术，观察肺组织病理变化，检测关键分子miR-200、Keap1、Nrf2基因和蛋白表达，以及下游靶点ARE、HO-1、γ-GCS、NQO1，分析该通路在IPF形成过程中的机制。并为了进一步阐明机制，研究了加入Keap1/Nrf2拮抗剂后，Keap1/Nrf2通路及其下游抗氧化因子的变化。研究结果证明芪归药对大剂量对BLM诱导的IPF大鼠模型有较好的治疗作用，可以促进miR-200/Keap1/Nrf2通路及其下游抗氧化因子的表达，但加入Keap1/Nrf2拮抗剂后，芪归药对对IPF模型大鼠仍有一定的保护作用，说明芪归药对不仅仅通过miR-200/Keap1/Nrf2通路发挥作用。第二部分为临床研究，观察了芪归药对对IPF患者生存质量和症状的改善，以六分钟步行距离、SGRQ问卷、HRCT、肺功能及MRC评分等为疗效评价，验证了芪归药对治疗特发性肺纤维化的临床疗效，证实芪归药对可以在一定程度上改善IPF患者的症状及生存质量。第三部分分别以黄芪和当归的有效成分黄芪甲苷IV和当归多糖为治疗药物，以TGF-β1诱导的肺纤维化细胞为研究对象，观察黄芪甲苷IV和当归多糖对肺纤维化细胞的影响。结果表明黄芪甲苷IV和当归多糖可以通过改善肺上皮间充质转化机制发挥对IPF的保护作用，完善了本项目的机制研究。