饲料中黄曲霉毒素B1对凡纳滨对虾肝胰腺损伤及其生理机制

o.As a shrimp farmed widely in the tropical subtropical regions where aflatoxin contamination has been generally detected, white shrimp (Penaeus vannamei) has been studied for aflatoxicosis evaluation. And aflatoxin B1 (AFB1) was chosen as the very important toxin. However, toxin of AFB1 exposure in previous studies resulted in apparent conclusions. Therefore, this work was designed to investigate the toxic effects and residue of AFB1 in white shrimp. Modern biotechnology was conducted to indicate the mechanism from levels of whole body, organ and cell, such as histology, microstructure analysis, immunological technique, gel electrophoresis and so on. The hepatopancrease cell was cultured in vivo and in vitro at the same time. Our results may shed light on basic nutrition biology and toxicological of shellfish and provide some or technical supports for the regulation of formula feed for white shrimp.

针对使用霉变配合饲料养殖对虾出现的肝胰腺损伤现象，选择黄曲霉毒素B1(AFB1)对凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)肝胰腺毒性作用为重要切入点（已有研究大多处于表观现象观察阶段），采用组织学和显微结构分析、免疫学和凝胶电泳等现代生物学技术，阐明AFB1导致凡纳滨对虾肝胰腺病变发生的过程和其在对虾体内的残留情况，同时对肝胰腺细胞进行体外培养，在整体、器官和细胞多个层次（in vivo和in vitro），对凡纳滨对虾肝胰腺对AFB1的代谢进行深入研究。研究结果对充实甲壳类营养生理学毒理学内容具有重要的理论意义，在实践中可为凡纳滨对虾配合饲料的研制提供科学依据。

随着中国对虾养殖的集约化发展，对配合饲料的需求日益增加，使得对虾饲料工业迅猛发展，对虾配合饲料中含有较高的蛋白质和脂肪含量，且对虾养殖的适宜季节正是我国的高温高湿季节，使其饲料更容易遭受霉菌毒素的污染，其中黄曲霉毒素B1污染饲料而造成的影响与损失显得尤为严重。目前黄曲霉毒素对人体的巨大毒害作用也已证实：损害人的肝脏，发生肝炎、肝硬化、肝坏死等；且有研究表明AFB1还会在动物体内以AFB1和AFM1的形式累积。若累积在对虾体内的AFB1被人类摄食，将会严重危害人类健康。.该项目通过探究饲料中AFB1所能引发虾表观损伤的最低浓度，反映AFB1对虾体营养成分、肝脂肪、肝胰腺组织学结构、免疫机能和抗氧化能力的影响以及在对虾体内的残留情况；并且在体外肝胰腺细胞培养的基础上，探究硒元素对虾肝胰腺细胞抗氧化影响及对高浓度AFB1毒性缓解作用，并且确定AFB1对对虾机体损伤过程中的各阶段的生理、生化指标的动态变化。.结果表明：.1、饲料中200 µg/kg AFB1即可使凡纳滨对虾生长速度下降，成活率降低。.2、凡纳滨对虾肝胰腺中的抗氧化能力随着饲料中AFB1含量的增加而下降。.3、饲料中有高浓度AFB1后，肝胰腺细胞会受到损伤且损伤规律是近消化道严重，逐渐向肝胰腺边缘扩散。.4、当对虾长时间摄入黄曲霉毒素B1时，肝胰腺中残留量大于肠道中残留量，肌肉中没有残留量检测出。AFB1代谢产物AFM1在虾体内的残留量与AFB1的残留趋势一致。.5、当加入高浓度的黄曲霉毒素B1时，细胞抗氧化系统相关酶均有下降趋势，但是加入合适浓度(0.45μｇ/ml)的硒元素后，抗氧化酶的活性恢复一定的水平。.6、细胞对高浓度的AFB1培养液较敏感，细胞随着AFB1含量的增加受到的毒性作用增强，总抗氧化能力降低。氧化性物质如丙二醛随着AFB1含量增加而呈现升高的趋势，而体内抗氧化酶活性在毒素含量在一定浓度范围内增加时呈现升高趋势，当达到一定浓度时酶活性则降低，说明较高浓度的AFB1对细胞已经产生不可修复的损伤。.7、高浓度AFB1对凡纳滨对虾对抗氧化酶的影响因酶种类而异，且在四周内便会造成酶的严重损伤。.8、Tris+EB+DNA体系加入AFB1后系统荧光峰值产生偏移，说明AFB1确实对DNA产生损伤，但无法确定是否产生AFB1-DNA加合物。