S100P在滋养细胞侵润中的作用及其机制研究

近30年来迅猛发展的辅助生育技术虽然解决了诸多不孕夫妇的生育问题，然而如何提高妊娠率仍是目前生殖医学领域的重要努力方向。近年来妊娠生理相关研究受到的关注正日渐增强。我们研究小组在前期工作中首次发现钙结合蛋白S100P在种植窗子宫内膜特异性高表达，进一步的研究表明S100P参与子宫内膜容受性的形成，并对母体层面细胞骨架与细胞黏附的影响进行了探讨，然而关于其在早期妊娠母胎界面上是如何发挥作用的及其是否参与调控滋养细胞侵润过程还不清楚。因此，本项目拟通过检测S100P在早期妊娠不同时期的定位及表达变化探讨其与滋养细胞侵润的关系。在此基础上进一步深入分析S100P对滋养细胞侵润的影响及其相关信号通路。以上研究成果有望明确S100P在滋养细胞侵润过程中的作用及其分子机制，对阐明S100P在母胎界面上的功能具有重要意义。

目的：钙结合蛋白S100P是S100家族中的一员，其最初从胎盘中分离出来， S100P在多种肿瘤细胞系及肿瘤组织中表达升高，研究证实S100P参与肿瘤细胞的浸润转移过程。早期妊娠过程中，滋养细胞对母体组织的正常侵润是决定正常胎盘形成以及正常妊娠的一个关键因素。滋养细胞的侵润过程与肿瘤细胞的转移过程有一定的相似性，研究发现S100P在胎盘的滋养细胞部位表达为高，而S100P是否作用于滋养细胞尚不明确。因此，本项目组主要致力于研究S100P在妊娠母胎界面的表达变化及在滋养细胞增殖与侵袭中的作用及作用机制。.方法： 通过收集早孕、孕中期及足月胎盘组织标本，Western-blot及免疫组织化学检测S100P在胎盘组织中的表达与定位；同时建立稳定转染S100P基因的JAR模型，用MTT和Transwell法分别检测S100P对滋养细胞增殖，迁移和侵袭的作用，用Western-Blot法检测S100P，P-P38，P-ERK，MMP-2 和Integrin α6蛋白的表达水平。SB203580阻断P38 MAPK的作用=后，再检测转染后JAR细胞增殖力与侵袭力有无变化，分析S100P在滋养细胞的作用机制。 .结果：S100P在整个妊娠期均成高水平表达，且主要定位于合体滋养细胞的胞浆与胞核，细胞滋养细胞呈弱阳性表达。与空载组相比，S100P转染组滋养细胞的增殖力，迁移力及侵袭力均增强，并有统计学差异（P<0.05）。上调S100P基因表达使滋养细胞P38 MAPK及ERK MAPK信号通路激活，P-P38与P-ERK蛋白表达升高，转染组与空载组之间有统计学差异（P<0.05）。同时S100P还能上调滋养细胞基质金属蛋白酶MMP-2的表达水平，转染组与对照组间有统计学差异（P<0.05）。此外，与空载组相比，转染组整合素家族成员Integrinα6表达显著上升，有统计学差异（P<0.05）。SB203580阻断P38 MAPK作用后，上调S100P表达不能使滋养细胞细胞增殖力及迁移力增强，转染组与空载组之间无统计学差异（P>0.05）。.结论：研究结果提示S100P能够增强滋养细胞增殖力，迁移力及侵袭力。P38 MAPK是S100P促进滋养细胞增殖及迁移的重要环节，且S100P也可能通过ERK MAPK 、MMP-2及Integrin α6信号通路作用于滋养细胞。