胰腺导管细胞癌miR-125a与吉西他滨化疗敏感性的相关性研究

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) has the worst prognosis among gastrointestinal tumors, most PDAC are at advanced stage and unresectable when the diagnosis is confirmed. Hence, chemotherapy is very valuable in the comprehensive treatments of PDAC, Gemcitabine is the first-line chemotherapy drug for PDAC, unfortunately, the clinical outcome still remains to be further improved. Through the establishment of drug-resistant cell line of PDCA, microRNA chip filtering, quantitative PCR validation, over-expression, low-expression of miR-125a to verify its role in PDAC chemoresistance, we found miR-125a play an important role in gemcitabine resistance. According to bioinformatics speculation, combined with the results of preliminary studies, we hypothesized that miR-125a may targeting PTCH1 of hedgehog signaling pathway to adjust the gemcitabine sensitivity of PDCA, the further study will include: over-expression and low-expression miR-125a in more PDCA cell lines to confirm its role in gemcitabine sensitivity; luciferase experiments to verify the target genes; in vivo and in vitro experimental study of miR-125a and gemcitabine sensitivity, in-depth study to explore its possible mechanism; to provide a new pre-judgment biomarker for gemcitabine sensitivity in the treatment of PDAC.

胰腺导管细胞癌是目前预后最差的消化道肿瘤之一，多数患者确诊时已是晚期，失去手术机会，因此，化疗是胰腺癌综合治疗中的重要内容之一。吉西他滨是胰腺癌化疗的一线药物， 但临床疗效一般。通过建立耐药细胞株，microRNA芯片筛选差异miRNA，荧光定量PCR验证，通过过表达、低表达miR-125a验证其在胰腺癌化疗耐药中的作用，我们发现miR-125a在胰腺癌化疗耐受中起着重要作用。根据生物信息学推测，结合前期研究结果，我们推测miR-125a可能通过作用于胰腺癌hedgehog信号通路中PTCH1而发挥调节吉西他滨化疗敏感性的作用。进一步的研究将包括：过表达、低表达胰腺癌细胞中miR-125a进一步确认其在胰腺癌化疗耐药中的作用，荧光素酶实验验证目的基因；体内、体外实验研究miR-125与吉西他滨化疗敏感性的关系；并就其可能的作用机制进行深入的研究。为预判临床胰腺癌化疗敏感性提供新的生物学标记

miR-125a与胰腺癌化疗耐药相关性研究.结题报告摘要...目的：1研究miR-125a在胰腺癌中的表达并进一步验证其在化疗敏感性中的作用。2研究miR-363在胰腺癌中的表达并进一步探讨其在胰腺癌侵袭、增殖中的作用。3研究CIP2A在胰腺癌中的表达，探讨其在胰腺癌耐药中的作用及机制。.方法：.1 miR-125a inhibitor、mimic分别转染胰腺癌SW1990耐药细胞株及SW1990细胞，CCK-8试剂盒检测转染前后不同浓度吉西他滨作用前后的细胞存活率。qRT-PCR,western检测转染前后A20表达情况。向胰腺细胞转染A20 siRNA，检测干扰前后A20表达变化及细胞耐药性的变化。Luciferase验证miR-125a与A20的关系。.2.检测胰腺癌细胞系及组织中miR-363的表达，miR-363 inhibitor及mimic分别转染胰腺癌SW1990细胞。测转染前后细胞增殖、集落形成、细胞侵袭、转移能力。qRT-PCR及western blot 检测转染前后SIRT6表达的变化。Luciferase实验验证miR-363与SIRT6的关系。干扰SIRT6，反向验证miR-363与SIRT6的配对关系。.3.检测胰腺癌组织及细胞株中CIP2A的表达，分析其与肿瘤分期，预后的关系。构建pshRNA 质粒转染胰腺癌SW1990细胞及SW1990吉西他滨耐药细胞，检测转染前后细胞对吉西他滨的IC50，检测不同浓度吉西他滨作用后的细胞凋亡情况。qRT-QCR及western blot 检测干扰前后CIP2A，p-AKT, BCL2表达的情况。.结果：.1 转染miR-125a mimic以后，胰腺癌细胞SW1990的耐药性显著增强；向SW1990耐药株转染miR-125a inhibitor以后，耐药株的耐药性明显减弱。转染前后靶基因A20在mRNA水平及蛋白水平有明显表达差异。Luciferase实验证实miR-125a与A20存在配对关系。.2 miR-363在胰腺癌细胞及组织中低表达；miR-363促进胰腺癌SW1990、Bxpc-3的增殖、侵袭和转移。SIRT6是miR-363直接的靶基因。敲除SIRT6基因促进胰腺癌细胞分化、增殖及侵袭转移。胰腺癌中miR-363表达水平与SIRT6表达负相关。.3 胰腺癌组织及细