PLCD1基因在乳腺癌中的甲基化状态及其分子机理研究

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，困扰着世界各地数百万患者，目前临床上还没有一个能早期诊断乳腺癌的指标。近年来表观遗传学的研究为肿瘤早期诊断提供了潜在的可能。磷脂酶C-δ1（PLCD1）是新发现的抑癌基因。我们前期研究证实PLCD1在67%乳腺癌细胞株中表达缺失，其表达缺失是由于基因启动子甲基化所致。本项目旨在利用甲基化特异性PCR检测PLCD1在乳腺癌组织和血清中的甲基化情况，通过分析PLCD1与乳腺癌分级、分期及受体的相关性，为乳腺癌的早期诊断提供靶点，为临床分期提供指导；用去甲基化方法逆转PLCD1表达，为探索抗肿瘤治疗的新型药物奠定基础；采用克隆形成实验、伤痕愈合实验、抑制性消减杂交技术、westernbot及免疫共沉淀等方法对PLCD1进行深入的功能及信号通路调控的研究，以期阐明PLCD1在乳腺癌癌变中的作用和机制，通过药物干预这种机制，为指导临床乳腺癌治疗提供新的认识及方向。

本项目以人乳腺癌细胞株（BT549,MB231,MB468,MCF7,SK-BR-3,T47D,YCC-B1,YCC-B3及ZR-75-1）及两株作对照用的正常乳腺上皮细胞株（HMEC和HMEpC）为研究对象，利用RT-PCR 技术探讨9株乳腺癌细胞株和2株乳腺正常上皮细胞株中mRNA 的表达，检测PLCD1在正常乳腺和乳腺癌的mRNA表达；运用本实验室建立的多种表观遗传学方法和手段探讨PLCD1基因在乳腺癌中的甲基化情况；利用去甲基化药物处理诱导乳腺癌细胞的表观遗传学重编程,以证实PLCD1表达缺失是否因启动子甲基化直接所致；通过研究体内、体外PLCD1基因重表达对乳腺癌细胞生长及成瘤能力的影响，进一步阐明PLCD1在乳腺癌发生发展中的作用及机制,为乳腺癌防治研究提供重要靶点或切入点；研究成果在国际上发表SCI 论文4篇，专题报告1篇,获科研成果奖两项。