调节性T细胞通过TRAIL-DR5信号通路诱导类风湿性关节炎FLS凋亡的研究

Excessive proliferation and defective apoptosis of fibroblast-like synovial cells (FLS) is the important pathogenesis of rheumatoid arthritis. Adoptive transfusion of activated regulatory T cells (Tregs) could delay the process of collagen-induced arthritis (CIA), but the role of Tregs in the synovium are not clear. Our preliminary study found that: activated Tregs induced apoptosis of FLS from CIA rats, but pretreatment with death receptor (DR)5 blocking antibody significantly inhibited the apoptosis of FLS. We propose that Tregs induces apoptosis of RA FLS by tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand(TRAIL)-DR5 signaling pathway. To test this hypothesis, the CIA rat model, Transwell co-culture, blocking antibodies, gene modified cells were used. The TRAIL-DR5 signaling pathway and the molecular mechanism in the induction of FLS apoptosis and in the inhibition of synovitis by Tregs were evaluated from molecule, cell and animal levels. The study is expected to reveal new mechanisms of Tregs in suppressing inflammation, and to provide new ideas for the prevention and treatment of arthritis.

成纤维样滑膜细胞（FLS）过度增殖和凋亡缺陷是类风湿性关节炎的重要病理机制。主动转输活化的调节性T细胞(Tregs)可以延缓胶原性关节炎(CIA)的进程，且Tregs的调节作用发生在滑膜局部，但是具体的效应细胞和作用机制未明。本课题组前期研究发现：体外活化的Tregs诱导CIA大鼠FLS凋亡；而预加入死亡受体（DR）5的阻断抗体，则FLS的凋亡率明显降低。因此，我们提出假说：Tregs 通过肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)-DR5信号通路诱导FLS凋亡。为验证该假说，拟采用CIA大鼠模型，Transwell共培养、抗体阻断实验、TRAIL过表达和表达沉默的细胞模型等，从分子、细胞以及动物整体水平探讨TRAIL-DR5信号通路在Tregs诱导FLS凋亡及抑制滑膜炎中的作用，阐明Tregs诱导FLS凋亡的分子机制。本研究有望揭示Tregs抑制炎症的新途径，为关节炎的防治提供新思路。

类风湿性关节炎(RA) 是一种以滑膜炎症为特征的慢性、进行性自身免疫性疾病，其主要病理特点是滑膜细胞异常增生，炎症细胞浸润，最终导致软骨和骨破坏。RA的患病率约为1%，严重危害人类身体健康。国内外对RA的研究众多，但由于RA 病因和发病机制极其复杂，目前尚无突破性进展。. Tregs是一群具有独特作用方式和功能特征的免疫细胞，主动转输Tregs能够抑制RA，并且在滑膜处检测到这些Tregs，但是目前关于Tregs在RA滑膜局部的效应细胞和作用机制尚不明确。本课题采用了大鼠CIA这一公认的RA动物模型，抓住FLS凋亡这一重要病理机制，研究Tregs对FLS生物学活性的影响，证明了Tregs能够通过诱导FLS凋亡从而抑制RA，揭示了Tregs抑制炎症的新机制。通过比较普通培养体系和Transwell共培养体系中Tregs诱导FLS凋亡的差异，发现细胞接触依赖机制在Tregs诱导FLS凋亡中起主导作用。寻找到Tregs诱导FLS凋亡的关键作用分子和诱导FLS凋亡的主要环节，阐明Tregs诱导FLS凋亡的信号转导通路。运用基因克隆和RNA干扰技术改变Tregs上关键作用分子的表达以及抗体阻断实验，体内外检测了Tregs对CIA大鼠疾病进程、关节炎症和FLS细胞凋亡的影响，阐明了Tregs在RA中的确切作用。进一步筛选到具有抗炎免疫作用的中药单体白花丹素，通过调控Tregs抑制关节炎症，为关节炎的防治提供了新思路。. 相关研究结果共整理发表SCI论文5篇（项目负责人为第一/共一/通讯/共通讯作者），并全部标注基金号。项目负责人参加3次国际/国内学术会议，且获得1次优秀学术论文奖。新获与本课题同一研究方向的面上项目1项。协助其他导师培养研究生，并以共一或者共通讯作者身份发表SCI文章。被批准为硕士研究生导师，开始招收硕士研究生。完成或者超额完成了预期的各项指标。