益气养阴活血法调节MLK/JNK-自噬机制介导的心脏成纤维细胞激活防治心力衰竭心肌纤维化的作用

The activation of cardiac fibroblast plays an important roles in heart failure and cardiac fibrosis. MLK3/JNK may be a new small important molecule target. Because a lot of attention has been paid to the role of autophagy in heart failure and myocardial remodeling ,some attention has been focused on the role of the cardiac fibroblast autoghagy mediated by MLK3/JNK in heart failure and cardiac fibrosis.The regulation on cardiac fibroblast autoghagy mediated by MLK3/JNK may be a novel therapeutic strategies for heart failure and cardiac fibrosis. In the project, we will explore the role of the autophagy mediated by MLK3/JNK in cardiac fibroblast in heart failure and cardiac fibrosis in vivo and in vitro, and the effect on autophagy mediated by MLK3/JNK in cardiac fibroblast of benefiting qi, nourishing yin and activating blood in heart failure and cardiac fibrosis in vivo and in vitro. The result of research project will provide the novel theoretical basis and experimental evidence for the role of MLK3 in the heart failure and cardiac fibrosis, and the therapy of cardiac fibrosis through autophagy and by benefiting qi and nourishing yin and activating blood.

心脏成纤维细胞激活并分化为肌成纤维细胞在心衰心肌纤维化中发挥着重要作用。MLK3可能在心衰心肌纤维化中发挥着重要作用，并成为心衰治疗新的重要小分子靶标。近年来自噬在心衰心肌纤维化中的作用受到重视，MLK3/JNK-自噬机制介导的心脏成纤维细胞激活可能在心衰心肌纤维化中发挥着重要作用，调节MLK3/JNK-自噬机制介导的成纤维细胞激活可能具有改善心衰心肌纤维化的作用。益气养阴活血法作为中医心衰治疗的主要方法，可能具有调节MLK3/JNK-自噬机制防治心衰心肌纤维化的作用。本研究拟通过制备整体动物模型、培养原代细胞，利用Western blot、腺病毒载体转染、siRNA、荧光探针、qPCR、免疫荧光等方法，在细胞和整体水平研究MLK3/JNK-自噬介导的心脏成纤维细胞激活在心衰心肌纤维化的作用及机制，以及益气养阴活血法调节MLK3/JNK-自噬抑制心脏成纤维细胞激活防治心衰心肌纤维化的作用。

心脏成纤维细胞激活并分化为肌成纤维细胞在心衰心肌纤维化中发挥着重要作用。MLK3可能在心衰心肌纤维化中发挥着重要作用，并成为心衰治疗新的重要小分子靶标。近年来自噬在心衰心肌纤维化中的作用受到重视，MLK3/JNK-自噬机制介导的心脏成纤维细胞激活可能在心衰心肌纤维化中发挥着重要作用，调节MLK3/JNK-自噬机制介导的成纤维细胞激活可能具有改善心衰心肌纤维化的作用。益气养阴活血法作为中医心衰治疗的主要方法，可能具有调节MLK3/JNK-自噬机制防治心衰心肌纤维化的作用。本研究拟通过制备整体动物模型、培养原代细胞，利用Western blot、腺病毒载体转染、siRNA、荧光探针、qPCR、免疫荧光等方法，在细胞和整体水平研究MLK3/JNK-自噬介导的心脏成纤维细胞激活在心衰心肌纤维化的作用及机制，以及益气养阴活血法调节MLK3/JNK-自噬抑制心脏成纤维细胞激活防治心衰心肌纤维化的作用。本项目按照计划开展研究，研究目标完成良好。在动物整体水平发现了MLK3/JNK-自噬轴介导了心衰时心肌细胞自噬，抑制MLK3或自噬水平均能改善慢性心衰心慢性心衰心功能和心肌肥大。益气养阴活血代表方心阴片低中高剂量能有效改善慢性心力衰竭心功能。结果提示MLK3/JNK-自噬轴介导了心肌细胞自噬在慢性心衰发病中发挥着重要作用，益气养阴活血代表方心阳片中高剂量具有调节MLK3/JNK-自噬轴防治慢性心力衰竭的作用。在细胞水平，证明了血管紧张素II刺激可导致成纤维细胞内质网发生自噬，抑制MLK3表达能有效抑制细胞自噬水平，益气养阴活血代表方心阴片含药血清能有效抑制AngII刺激导致细胞的自噬，其机制可能是通过抑制MLK3/JNK信号通路实现。本研究结果为未来筛选治疗慢性心力衰竭药物提供了实验基础。同时为益气养阴活血法及其代表方心阴片未来在临床的推广应用提供了实验依据和理论支持，也将为益气养阴活血法及其代表方心阳片广泛治疗慢性心力衰竭带来较好的社会效益和经济效益。