BAFF干扰的树突状细胞参与自身免疫性关节炎免疫耐受的作用和机制

Inducing immune tolerance by building regulatory dendritic cells (DCreg) in vitro is an important means of reconstitution immune function in autoimmune diseases. The B lymphocyte-activating factor (BAFF) plays an important roles in regulating B and T cell survival and activation. BAFF is mainly produced by DC. BAFF regulates T and B cell activation may through induction of DC immunity in an autocrine or paracrine manner. Whether or not BAFF gene silencing bone marrow-derived DC induce Dcreg? Whether or not induced DCreg mediates immune tolerance through regulating regulatory T cells (Treg)? How the Dcreg regulate Treg, rebuilding immune function, exerting treatment roles in autoimmune disease? Base on previous studies, in vitro we observe the roles and mechanisms of DCreg on Treg through BAFF gene silencing bone marrow-derived DC to induce Dcreg. In vivo, we investigate the effects and the mechanisms of DCreg induced by CCII on collagen-induced arthritis (CIA) rats. The project intends to build a cell immunotherapy based on the theory of immune tolerance, which may provide theoretical basis and technology platform for the treatment of autoimmune diseases.

体外构建调节性树突状细胞（DCreg）诱导免疫耐受是自身免疫病免疫功能重建的重要手段。B淋巴细胞活化因子（BAFF）是B、T细胞存活和活化的重要调节因子。树突状细胞（DC）是BAFF的主要产生细胞，BAFF通过自分泌或旁分泌诱导DC的免疫原性从而调节T、B细胞活化，那么体外BAFF基因沉默骨髓源DC能否诱导DCreg？诱导的DCreg能否通过调控调节性T细胞（Treg）介导免疫耐受？DCreg通过怎样的机制调控Treg，重建免疫功能，发挥治疗自身免疫病的作用？本项目在以往研究的基础上，BAFF基因沉默骨髓源DC诱导DCreg，体外观察DCreg对Treg的作用和调控机制；体内鸡Ⅱ型胶原（CCⅡ）诱导的DCreg过继转移胶原性关节炎小鼠，探讨抗原特异性免疫调节的治疗作用和机制。本项目拟构建一个以免疫耐受为理论基础的细胞免疫疗法，为临床治疗类风湿关节炎等自身免疫病提供理论依据和技术平台。

成功诱导免疫耐受用于自身免疫病的免疫功能重建一直是免疫学家梦寐以求的治疗策略。树突状细胞（DC）是目前已知的机体内功能最强的抗原提呈细胞，与炎症反应和自身免疫病密切相关。调节性DC（DCreg）是一类具有免疫调节功能的DC，这类细胞低表达或不表达共刺激分子，具有负向免疫调节反应和维持免疫耐受的功能。研究表明，经过特殊基因修饰后工程化DCreg，可有效缓解自身免疫性关节炎的症状，提示建立特定条件诱导DCreg是控制免疫应答向免疫耐受发展的关键。B淋巴细胞活化因子（BAFF）是B细胞存活的重要调节因子，同时，BAFF作为重要的共刺激分子调节T细胞的功能和活化。DC是BAFF的主要来源细胞，且表达BAFF的三种受体TACI、BCMA和BAFF-R。课题组前期已经表明BAFF不仅在B细胞介导的免疫反应中发挥重要作用，还可以调节T细胞介导的自身免疫反应，但是BAFF如何调节T细胞反应目前未见报道。本研究构建小鼠BAFF基因shRNA慢病毒转染骨髓源DC（LV-shBAFF DC），有效沉默DC的BAFF表达，体外观察DCreg对T细胞的作用并探讨其调控机制，体内DCreg过继转移胶原性关节炎（CIA）小鼠，探讨其治疗作用和机制。结果表明：（1）LV-shBAFF DC表现出DCreg的功能和特性，BAFF mRNA和蛋白表达明显减少，表面分子CD40、CD80、CD86低表达，高表达PD1-L、ICOS-L 和TLR2，诱导T细胞增殖反应能力降低，产生IL-10和TGF-β水平增加。（2）LV-shBAFF DC可有效缓解小鼠CIA的关节炎症状，改善关节病理表现，抑制外周血中抗CCⅡ抗体、IL-6、IL-17和IFN-γ水平，升高TGF-β、IL-10和IL-4水平，抑制CCⅡ诱导的T细胞增殖反应，降低脾脏中Th17比例和ROR-γt mRNA表达，升高Treg比例和Foxp3 mRNA和CTLA-4表达。本研究通过重建免疫耐受，为进一步探讨类风湿关节炎（RA）作用机制和临床治疗提供新的治疗措施和理论依据。