成年无精男性睾丸新型蛋白标志物的筛选、鉴定及功能研究

We analyzed the clinical testis samples of Sertoli cell only syndrome (SCOS) patients by two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) and matrix-assisted laser desorption time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF/TOF MS) and found hnrnp-1 as a key factor contributing to SCOS（J Proteomics,2012）. Based on these studies, here, we will aim to find the key proteins involved in spermatogenesis and azoospermia by analysing testis from the azoospermia patients using function proteomics screening strategies. Proteins suggested as the candidates of key regulators will then be analyzed by String and Pubgene bioinformatic programs. Expressions of these candidate proteins will be further confirmed in testis samples from azoospermia patients or animal models by immunohistochemical staining and western blotting. Moreover, in vitro and in vivo experiments will be performed to know the effects of the candidate proteins on proliferation,apoptosis or migration of spermatogenic cell or sertoli cells.Key signal pathways and proteins regulated by these candidate proteins will be searched by using fluorescent differences gel electrophoresis(DIGE).New biomarkers will be discovered as the new molecules or targets in the future diagnosis and treatment of male infertility.

前期我们应用双向电泳结合质谱技术分析成人唯支持细胞综合征患者睾丸组织获得一批功能相关蛋白，确定了hnrnp l蛋白参与调控精子发生，并与无精子症特别是成人唯支持细胞综合征紧密相关（J Proteomics,2012）。在此基础上，我们拟应用功能蛋白组学策略分析生精功能低下或生精功能阻滞患者睾丸差异蛋白，结合生物信息学筛选出可能与精子发生相关的关键蛋白，并应用Western Blot和免疫组化在生精障碍动物睾丸组织及生精低下或生精阻滞患者睾丸活检标本进行验证；同时进一步通过候选关键蛋白过表达及敲低的方法观察在体小鼠睾丸生精功能改变及体外各生精细胞增殖和凋亡等生物学行为的影响；应用荧光差异凝胶电泳（DIGE）等确定候选蛋白参与调控的关键蛋白，明确候选蛋白参与调控与精子发生相关的关键信号通路。研究将获得新型成年无精男性睾丸新型标志物，为男性不育症的诊断和治疗提供新的分子或靶点。

前期我们应用双向电泳结合质谱技术分析成人唯支持细胞综合征患者睾丸组织获得一批功能相关蛋白，确定了 hnrnp l 蛋白参与调控精子发生，并与无精子症特别是成人唯支持细胞综合征紧密相关（J Proteomics,2012）。在此基础上，我们拟应用功能蛋白组学策略分析生精功能低下或生精功能阻滞患者睾丸差异蛋白，结合生物信学筛选出可能与精子发生相关的关键蛋白，并应用 WesternBlot 和免疫组化在生精障碍动物睾丸组织及生精低下或生精阻滞患者睾丸活检标本进行验证；同时进一步通过候选关键蛋白过表达及敲低的方法观察在体小鼠睾丸生精功能改变及体外各生精细胞增殖和凋亡等生物学行为的影响；应用荧光差异凝胶电泳（DIGE）等确定候选蛋白参与调控的关键蛋白，明确候选蛋白参与调控与精子发生相关的关键信号通路。研究将获得新型成年无精男性睾丸新型标志物，为男性不育症的诊断和治疗提供新的分子或靶点。