血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)在大鼠脊髓全横断损伤后修复的作用及其分子信号通路的研究

项目研究内容和意义简介：.本室前面的工作发现猴脊髓损伤后血小板源性生长因子（PDGF-BB）表达上调，提示其在脊髓可塑性中发挥作用。在此基础上，本项目制作大鼠脊髓全横断模型，分别用HSV-PDGF-siRNA（干扰PDGF mRNA）及PDGF-BB 抗体技术，结合行为学BBB 评分系统研究大鼠功能恢复过程中行为学变化，探讨PDGF-BB在损伤脊髓修复中的作用；进而用BDA 追踪、免疫组化技术从形态学角度观察PDGF-BB对神经再生和神经元存活的影响，用RT-PCR 和Western blot等分子生物学技术阐明与PDGF-B下游有关的信号通路分子stat3等的变化。项目研究结果不仅从形态学和细胞分子生物学角度阐明PDGF-BB促进脊髓可塑性的细胞分子机制，而且可为临床运用PDGF-BB促进脊髓损伤修复提供实验支持，有重要的科学价值和临床意义。

本项目研究结果显示：体外，HSV-siPDGF-BB稳定转染后干扰了PDGF-BB的表达、影响了星形胶质细胞的生长及活性，PDGF-BB基因和蛋白表达明显下调。体内部分：HSV-siPDGF-BB处理的大鼠与HSV处理的大鼠比较，损伤点周围PDGF阳性细胞显著减少，且PDGF-BB蛋白及其mRNA和它的下游信号分子STAT3均明显下调；大鼠后肢运动功能评分明显降低；说明干扰损伤局部的PDGF-BB表达可以显著改善脊髓损伤大鼠的运动功能；CSEP(P1N1P2型)显示出部分的恢复；潜伏期明显变短，有显著性统计学差异；在注射入PDGF-BB抗体组，与注射IgG的对照大鼠比较：GEAP-免疫细胞细胞数量显著下降；与这些发现相一致的是，PDGF-BB表达明显下调，且PDGF抗体封闭的疤痕组织内PDGF-BB的下游信号分子p-stat3明显下调；SCT后第8周，GFAP标记的星形细胞在SCT后的疤痕组织中明显增加。而用PDGF-BB抗体处理后，星形细胞数量明显减少，疤痕的大小和体积也变小了；从术后第7天开始直到术后28天，在所有SCI大鼠的BBB评分逐渐增加，但是此作用在PDGF-BB抗体封闭处理组大鼠增加尤为显著。PDGF-BB抗体封闭波潜伏期与SCI组比较明显变短，有显著性统计学差异；PDGF干扰和抗体封闭组相比，无统计学差异。波幅：PDGF-BB抗体封闭组潜伏期与SCI组比较减小，有显著性统计学差异。综上，本项目从形态学和细胞分子生物学角度阐明PDGF-BB促进脊髓可塑性的细胞分子机制，为临床运用PDGF-BB促进脊髓损伤修复提供实验支持，有重要的科学价值和临床意义。本项目实施过程中共：共发表论文6篇，其中中文核心期刊2篇；SCI收录论文3篇、科技类核心1篇；接收SCI论文1篇，出版科学出版社论著4部；组织课题组成员参加国内学术会议4次，发表论文摘要1篇；培养硕士研究生10名，其中5人已经取得硕士学位，1人获得博士学位，其余在读；课题组一人晋升讲师，培养新教师1名。