胰腺癌抗原特异性iNKT细胞的构建和抗肿瘤活性研究

本课题利用具有强效细胞毒活性和免疫活化作用的人不可变自然杀伤T（iNKT）细胞，人为使其表达识别肿瘤抗原的特异性T细胞受体，构建对胰腺癌细胞具有特异性杀伤作用、低副作用的抗肿瘤效应细胞。通过探讨iNKT细胞为基础抗肿瘤效应细胞的细胞因子产生、对特异性抗原增殖反应性、对癌细胞杀伤作用、对树突状细胞佐剂效果和对癌微环境富集髓性抑制性细胞的免疫抑制消除作用，明确iNKT效应细胞功能，综合评估其抗肿瘤活性。实验从细胞水平揭示各免疫细胞间细胞因子介导的相互作用，从分子水平阐述细胞间作用及肿瘤微环境对诱导细胞分化的转录因子影响。利用iNKT效应细胞改善癌周微环境免疫抑制性同时诱导持续、强效抗肿瘤作用的优势，开发新型免疫细胞疗法，为胰腺癌治疗提出一个新思路。

本课题利用具有强效细胞毒活性和免疫活化作用的人不可变自然杀伤T（iNKT）细胞，人为使其表达识别肿瘤抗原的特异性T 细胞受体，构建对胰腺癌细胞具有特异性杀伤作用、低副作用的抗肿瘤效应细胞。通过探讨iNKT 细胞为基础抗肿瘤效应细胞的细胞因子产生、对特异性抗原增殖反应性、对癌细胞杀伤作用、对树突状细胞佐剂效果和对癌微环境富集髓性抑制性细胞的免疫抑制消除作用，明确iNKT 效应细胞功能，综合评估其抗肿瘤活性，开发新型免疫细胞疗法，为胰腺癌治疗提出一个新思路。.采用iNKT和DC共培养体系，alpha-GalCer刺激下，DC产生IL-12p70增多，骨桥蛋白(osteopntin: OPN)产生显著受到抑制。癌细胞和癌周微环境中浸润的多种细胞都产生OPN，促进癌的转移。而且，癌组织中及静脉血中OPN表达水平上升，揭示肿瘤预后不好。所以，iNKT细胞通过与DC的相互作用，促进IL-12p70依赖性细胞免疫应答的同时，减低OPN表达水平，抑制肿瘤的转移。iNKT细胞产生的细胞因子中IFN-gamma, IL-4, IL-13促进DC产生IL-12p70，抑制OPN的产生。DC通过IL-12p70产生增加和OPN产生降低来诱导NK和CTL的活化，促进细胞性免疫应答，抑制肿瘤周围炎症微环境，其诱导OPN依赖性肿瘤的增殖和转移。. 应用树突状细胞（DC）构建的疫苗多被希望用于抗原特异性肿瘤免疫治疗。但是，从癌症患者身上获取DC前体细胞的数量是非常有限的，因此阻碍了这一疗法的广泛应用。我们建立了由胚胎干细胞（ES）和诱导型多能干细胞（iPS）产生DCs的方法，但是这种诱导分化的方法复杂且耗时。在我们的研究中，先从小鼠ES细胞诱导髓系细胞，接着转导c-Myc基因，构建的细胞传代超过3个月，属于粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）依赖型。这些细胞表达MHC-I、MHC-II、CD11b、CD11c、CD80、CD86和DEC205，在成熟刺激下，诱导产生TNF-alpha和IL-12p70，MHC-II、CD40、CD86的表达上调，证明这些细胞可以诱导为成熟DC。类似骨髓来源DC具有激发初始混和淋巴细胞反应的能力。这些细胞用H-2Kb限制性OVA肽片段处理后转入小鼠体内，表现出对OVA-表达黑色素瘤明显的抵抗作用。这些髓系细胞具有细胞因子依赖型增殖反应刺激诱导抗原特异性。