针对细菌/真菌的通用性模式识别蛋白的结构解析与识别特性

利用自有的富集纯化体系结合常规柱层析法，从柞蚕幼虫血淋巴中纯化获得一种对细菌和真菌兼具识别能力的模式识别蛋白-柞蚕肽聚糖识别蛋白。分析天然活性识别蛋白的部分生物学性质，并利用不同的病原体相关分子模式，考察并验证其识别特性。利用变性肽聚糖识别蛋白的N-末端和分子内部分氨基酸序列，设计简并探针、引物及特定引物，分别从cDNA文库、cDNA pool和染色体DNA中获得该蛋白的cDNA和染色体DNA序列，比对验证序列，同时比对天然活性识别蛋白的实测分子量（通过生物质谱测定）和理论分子量（通过基因编码的成熟肽推导），获得该蛋白的一级结构信息。对这种新的通用性识别蛋白的纯化、部分生物性质和识别特性研究以及一级结构的解析，不仅补充和发展了现有的昆虫免疫识别及其防御机制理论，也为利用此蛋白广泛的识别特性，研究和开发具有自主知识产权的广泛性微生物（感）污染快速、高通量检测技术提供必要的理论依据和物质基础。

模式识别蛋白是先天性免疫系统的一个重要组成成分，能够识别病原微生物并激活下游级联系统。目前对模式识别蛋白的研究主要集中于基因水平，而对天然活性蛋白的生物学功能研究较少。本研究以柞蚕为实验模型，从血淋巴中纯化获得一种重要模式识别蛋白--肽聚糖识别蛋白（peptidoglycan recognition proteins, PGRPs），并对其进行一级结构及生物学功能的研究。. 本研究首次从柞蚕幼虫体内分离纯化一种具有天然活性的肽聚糖识别蛋白，并通过分子生物学技术，获得柞蚕PGRP 一级结构序列。生物学功能研究结果表明，该蛋白是细菌及真菌的通用性模式识别受体，其识别作用可激活酚氧化酶原激活系统，是酚氧化酶原激活系统所必需的组成成分。同时，天然活性PGRP对PGN及G+细菌具有凝集作用。此外，本研究通过天然纯化和体外重组手段从柞蚕体内分别获得两种其他类型的重要的模式识别蛋白--β-1 ,3-葡聚糖识别蛋白及C-型凝集素，并对其结构和功能进行了初步研究。. 综上所述，对柞蚕PGRP及另外两种模式识别蛋白的研究，为补充和完善现有的模式识别蛋白功能提供理论基础，并对进一步研究柞蚕先天性免疫系统提供理论基础。