功能未知lncRNA：KB-1471A8.2调控自噬影响卵巢癌化疗耐药的作用机制

KB-1471A8.2, a lncRNA of unknown function, was screened from lncRNA microarray and specially low-expressed in chemotherapy-resistant ovarian tumor tissue. Our previous study indicated that KB-1471A8.2 was down-regulated in a number of drug-resistant ovarian cancer cell lines and over-expression of KB-1471A8.2 in resistant cell lines could significant increase cells sensitive to anti-tumor drug. Bioinformatic analysis and experiment data indicated that DEPTOR, an specific inhibited protein of mTOR, could be a candidate target gene of KB-1471A8.2. Literature reported that DEPTOR could regulate drug resistance in some types of cancer through inhibiting mTOR then inducing autophagy, and we verified that the level of autophagy in chemotherapy-resistant ovarian cancer cell lines declined when KB-1471A8.2 was over-expressed. Base on these data, we propose a scientific hypothesis that KB-1471A8.2 regulated chemoresistance in ovarian cancer by DEPTOR modulating autophagy of cancer cell. Using DEPTOR as a mechanism clue, we will further investigate biological characteristics and regulatory mechanism of KB-1471A8.2 in ovarian cancer. Up to now, there is no report of KB-1471A8.2 in chemoresistance of ovarian cancer. This study may provide a therapeutics target of ovarian carcinoma.

KB-1471A8.2（简称KB）是我们通过lncRNA芯片筛选获得的、低表达于耐药卵巢癌组织、功能未知的一条lncRNA。前期发现，多种卵巢癌耐药细胞株中KB普遍低表达；过表达KB可显著逆转肿瘤细胞的耐药性；生物信息学分析及实验验证DEPTOR可能是KB调控的下游靶标，而文献已报道DEPTOR可通过抑制mTOR、诱导自噬的机制改变肿瘤细胞耐药；我们则发现过表达KB也可降低卵巢癌耐药细胞的自噬水平。因此，我们提出KB靶向调节DEPTOR、调控自噬、影响卵巢癌细胞耐药的新机制。研究拟阐明KB的生物学特征；以过表达/表达沉默技术，体内、体外评估KB在卵巢癌耐药中的作用；以DEPTOR为线索，采用挽救策略，论证其通过自噬调控卵巢癌耐药的分子机制。目前未见该lncRNA相关研究报道，本研究有望为逆转卵巢癌耐药提供新靶标。

卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤，严重威胁女性生命健康。目前肿瘤细胞减灭术辅以铂类为基础的化疗是卵巢癌治疗的主要手段，但70%的卵巢癌就诊时已经是晚期，发生广泛转移，同时70%的卵巢癌患者化疗初期敏感，但迅速出现腹部或者盆腔复发，并进一步发展为耐药。因此深入研究卵巢癌的转移及复发耐药机制，寻找有效干预靶点是改善卵巢癌化疗效果和提高卵巢癌生存率的关键。近年来，非编码RNA尤其是lncRNA在肿瘤进展及耐药中的作用受到越来越多的关注。我们首先利用高通量测序筛选了卵巢癌紫杉醇耐药样本及对照样本中差异表达的lncRNA及mRNA，共获得差异lncRNA 6231条，差异mRNA 9125条（多药耐药基因ABCB1、ABCB4、ABCC3和AGCG2均在耐药样本中显著升高），将我们的数据和已经发表的卵巢癌顺铂耐药组织及顺铂耐药细胞中差异表达的lncRNA取交集，共获得5条上调的和21条下调的lncRNA。随后我们研究了在卵巢癌耐药样本中下调的lncRNA KB-1471A8.2、ZEB1-AS1及RFPL1S在卵巢癌化疗耐药及肿瘤进展中的作用，结果发现1）KB-1471A8.2可以显著增加卵巢癌对紫杉醇的敏感性，抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移，促进其凋亡；2）KB-1471A8.2主要定位于细胞核中；3）KB-1471A8.2过表达后，自噬相关基因DEPTOR的表达及定位均没有显著变化，自噬分子标记LC3的表达也没有显著变化；4）KB-1471A8.2过表达可以降低CDK4的表达，从而抑制卵巢癌细胞的G1/S进展；5）ZEB1-AS1可以增加卵巢癌细胞对紫杉醇和顺铂的敏感性；5）ZEB1-AS1并不影响ZEB1的mRNA和蛋白表达；6）ZEB1可通过MMP19调控卵巢癌对化疗药物的敏感性；7）RFPL1S可以抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移，促进紫杉醇诱导的卵巢癌细胞的凋亡；8）过表达RFPL1S可以显著抑制IFNβ-STAT1通路；9）RNA pull down和RIP实验发现RFPL1S能结合DHX9和DDX3。在该项目支持下，目前共发表论文14篇，其中SCI论文11篇，申请国家发明专利2项，获奖3项，另有数篇论文正在评审或撰写中。此外，在项目实施期间，共培养硕士研究生5名和青年科研人员1名，1人次参加国际学术会议（壁报展示）。