自噬对卵巢癌细胞耐药及失巢凋亡抵抗的调控作用

死亡率居妇科恶性肿瘤之首的上皮性卵巢癌极易发生远处转移和多药耐药，探讨阐明卵巢癌化疗耐药及侵袭转移机制是亟待解决的关键问题。自噬-溶酶体途径通过降解胞质细胞器及错误折叠和聚集蛋白，在细胞新陈代谢中发挥至关重要的作用。目前发现自噬作为一个全新的细胞死亡调节通路在人类肿瘤的发生发展中起重要调控作用。我们前期工作表明：自噬在某药（FYY720）介导的抗卵巢癌效应中发挥保护作用；卵巢癌耐药细胞株的自噬水平明显高于敏感细胞株；失巢凋亡的强力抑制剂TrkB促使卵巢癌侵袭转移。本课题首次将自噬和卵巢癌耐药及失巢凋亡抵抗有机的结合在一起，通过检测自噬调控分子在卵巢癌各期标本、原发灶及腹膜转移灶标本、敏感及耐药复发标本中的表达差异，继而深入研究自噬在卵巢癌耐药及失巢凋亡抵抗中发挥的效应及调控机制，以明确具有双重作用的自噬在卵巢癌体系中发挥的作用，揭示卵巢癌耐药转移机制新视角，为开展新的靶向治疗提供理论依据。

研究目的与方法：.1.采用免疫组化及蛋白印迹法分析自噬效应分子在组织及细胞株中的表达情况，明确自噬与卵巢癌发生、耐药及转移的相关性；.2.采用凋亡和自噬相关分子生物学技术，探索具有双刃剑效应的自噬在卵巢癌细胞耐药及转移中发挥的具体调控作用，为卵巢癌细胞的耐药转移机制提供研究新视角；.3.构建失巢凋亡的模型研究细胞间（ECM）信号通路在调控细胞自噬，进而导致卵巢癌细胞失巢凋亡抵抗中的作用，为开发卵巢靶向治疗的新方法提供理论依据。.研究结果.1．卵巢癌化疗敏感临床标本与耐药标本相比，PP2Ac的表达明显增高，而LC3的表达明显降低，两者之间存在相关性。.2．在卵巢癌耐药细胞中，自噬的表达水平明显增高，而且有明显的CDDP浓度依赖性，而且3-MA或者siRNA抑制自噬表达可以增加细胞对CDDP药物的敏感性。.3．PP2Ac在卵巢耐药细胞中的表达降低。PP2Ac对LC3的表达有明显的负调控作用。通过PP2Ac质粒过表达或者小剂量FTY720增加PP2A活性，CDDP诱导耐药细胞自噬明显降低，增加了细胞对药物的敏感性。而干扰PP2Ac可以增强耐药细胞自噬表达，增强其对CDDP药物的耐受性。.4．卵巢癌敏感和耐药细胞株裸鼠原位成瘤模型显示：铂类耐药细胞成瘤其自噬表达明显高于敏感细胞成瘤。.5．卵巢癌上皮细胞模拟失巢凋亡的悬浮培养、Matrigel铺胶培养、常规培养中，失巢凋亡培养细胞自噬表达明显增强，其次为铺胶培养。而且整合素表达在失巢凋亡中明显降低。.研究结论.本课题主要针对临床上出现的大量卵巢癌化疗耐药，以期探寻新的靶向治疗克服耐药为目的。通过临床病理标本、细胞分子生物学实验和动物模型研究自噬在卵巢癌耐药及失巢凋亡抵抗中所起到的重要作用及其调控机制。.1.在卵巢癌耐药细胞中自噬起到保护性作用，是造成肿瘤耐药的重要原因之一，抑制自噬可以促进耐药细胞对肿瘤的敏感性。.2.PP2Ac负调控卵巢癌耐药细胞自噬作用，小剂量FTY720可以提高PP2A活性，降低细胞自噬的分子的表达，而且作为化疗增敏剂促进肿瘤对化疗药物的敏感性。.3.自噬是造成卵巢癌失巢凋亡抵抗的重要原因，其主要通过整合素途径调控肿瘤细胞的自噬作用。两者之间存在负调控关系。