基于人胎盘屏障体外模型双黄连治疗孕妇流感的安全性研究

Gestational women are in high risk and high incidence of severe and fatal cases of influenza.The medication safety during pregnancy is a tough problem faced by physicians. Shuanghuanglian inhibit the influenza virus has been confirmed, our previous study suggested that Baicalin which is embryonic accumulated component from Shuanghuanglian has showed weak embryotoxicity by embryonic stem cell test（EST）. View of: ① The nutrients required by fetus are derived from the placenta. ② The Chinese medicine components are complex, it is difficult to predict the interaction between components, and single component embryotoxicity investigation can not be used to evaluate the safety totally.③ Due to species differences, the results of animal experimental are difficult to be applied to human. Therefore, the Chinese medicine components through the placental barrier should be the test substance to evaluate the drug embryonictoxicity. The purpose of this study: ① Establish model of human placental barrier in vitro, obtain the components through the placental barrier as a test substance, and evaluate Shuanghuanglian embryotoxicity by EST. ② Observe the effect of Shuanghuanglian on smooth muscle uterine in vitro. ③ Analyze the Chinese medicine components in fetus by HPLC-MS to clarify the fetal intrauterine exposure of Shuanghuanglian. We intend to evaluate the Shuanghuanglian's drug safety, and provide a set of system to evaluate the application of Chinese medicine safety during pregnancy with Chinese medicine characteristics.

孕妇是流感高发、重症及死亡的高危人群，其妊娠期用药的安全性是临床面临的棘手问题。双黄连可抑制多种流感病毒的有效性已得到证实，课题组前期应用EST实验评价双黄连胚胎蓄积组分黄芩苷为弱胚胎毒性。鉴于：①妊娠期胎儿所需的营养物质均来源于胎盘，②中药组分复杂，成分间相互作用难以预测，仅考察单一组分的胚胎毒性不能全面评价其安全性，③种属差异使动物实验结果难以直接外推到人类。因此，以胎儿体内药物成分为受试物得到的胚胎毒性预测才能准确评价药物的安全性。本课题拟①建立人胎盘屏障体外模型，获得透过胎盘屏障进入胎儿体内的药物成分作为受试物进行EST，评价双黄连的胚胎毒性。②应用人离体子宫平滑肌实验观察双黄连对子宫平滑肌的影响。③应用HPLC-MS技术分析胎儿体内药物成分，明确双黄连胎儿宫内暴露的物质基础。科学地评价孕期应用双黄连的安全性，并为妊娠期应用中药的安全性评价提供一套符合中医药特点的系统的研究方法

中药透过胎盘屏障可导致胎儿宫内暴露，前期研究发现黄芩苷是双黄连胎儿宫内暴露的主要成分，具有弱胚胎毒性。但中药组分复杂，仅考察单一组分的胚胎毒性不能全面评价其安全性，而种属差异也使动物实验结果难以直接外推到人类。透过人胎盘屏障的药物成分作为“体内真实制剂”，以其为受试物预测胚胎毒性更为准确。妊娠期应用中药的安全性可从“中药-母体-胎儿”角度评价。因此，为阐明妊娠期应用双黄连的安全性，建立一套符合中医药特点的妊娠期应用中药安全性评价方法，本课题开展了以下研究工作：.（1）建立人胎盘屏障体外模型，获得透过人胎盘屏障的药物成分：采用胎盘组织薄片培养结合Ussing扩散池建立了人妊娠中、晚期胎盘屏障体外模型，经形态学、功能学鉴定和临床应用验证，该系统具备在体胎盘的物质交换、屏障和内分泌功能，能够在离体情况下实时进行药物经胎盘的转运和代谢等体内过程的相关研究。.（2）从“中药-母体-胎儿”角度评价妊娠期应用双黄连的安全性：以双黄连透过人胎盘屏障的药物成分为受试物进行了胚胎干细胞试验，结果双黄连透过胎盘屏障的药物成分无胚胎毒性，胎盘屏障可减少药物的宫内暴露，从而减弱药物对胎儿的影响。. 运用BL-420F 生物机能实验系统及软件记录并考察双黄连对离体子宫肌条收缩的影响，结果双黄连对人子宫平滑肌收缩幅度和收缩频率没有显著性影响（P>0.05），提示双黄连不影响子宫平滑肌收缩。.（3）明确双黄连宫内暴露的药物成分，为有效性和安全性评价提供依据：建立双黄连胎盘灌流液的HPLC分析方法，利用该法检测妊娠晚期宫内暴露的药物成分为木犀草素、连翘苷、黄芩苷和汉黄芩苷，而妊娠中期未检测到药物成分，提示妊娠中期应用双黄连胎儿宫内暴露程度低，较为安全。. 综上，（1）妊娠中期应用双黄连较安全，晚期应用可造成胎儿宫内暴露，用药过量可能产生胚胎毒性。（2）妊娠期应用双黄连不诱发子宫收缩。(3)以透过胎盘屏障的药物成分为受试物进行胚胎干细胞实验更具科学性，对临床合理用药具有参考价值。该研究能够体现中药的体内过程，为评价妊娠期应用中药的安全性提供了一套新型、高效的研究方法。