负载不同蛔虫抗原的DC影响调节性T细胞反应性的比较

本项目基于研究小组前期工作的积累，从免疫学的角度对人蛔虫和猪蛔虫的宿主寄生特异性进行更深入的研究，本研究拟用这两种蛔虫体腔液（Ascaris body fluid，ABF）作为两种不同抗原，通过分离纯化获得DC及CD4+ CD25+ T，分别用ABF分为高、中、低剂量组负载于不同抗原的DC，观察其影响CD4+ CD25+ Treg的结果。通过对CD4+ CD25+ Treg膜分子CTLA-4、GITR、转录因子Foxp3的表达和细胞因子TGF-β、IL- 10的分泌分析，以及各实验组Th1类细胞因子和Th2类细胞因子的测定，评估负载了两种不同蛔虫抗原的DC对CD4+ CD25+ Treg的影响，同时探讨其作用机制，深入了解这一过程并进一步分析这一差异,对于深入研究不同蛔虫的宿主寄生特异性的免疫学机制具有重要意义。

本项目基于研究小组前期对人蛔虫和猪蛔虫蛔虫种群分子遗传学的研究积累，从免疫学角度对这两种蛔虫的宿主寄生特异性进行更深入的研究。课题按照计划目标完成了树突状细胞（Dendritic cells DC）的分离、诱导、鉴定；调节性T细胞（Tegulatory cells Treg）的分离、鉴定以及两种蛔虫抗原刺激DC对Treg影响的实验，首次获得了人蛔虫和猪蛔虫蛔虫抗原对Treg反应性的实验室数据。在项目实施过程中应用免疫磁珠分离得到高纯度的Treg细胞，将分别负载了人蛔虫和猪蛔虫蛔虫抗原的DC与Treg细胞混合培养，通过定性、定量分析得出在不同浓度干预下和不同时间段作用下调节性T细胞的反应性的差别，得结论：相同条件下负载了人蛔虫抗原与猪蛔虫抗原的DC对Treg的影响不同，负载猪蛔虫抗原的DC能够促进Th2类淋巴细胞发生更强烈的反应，并抑制Foxp3表达 ,影响调节性T细胞（Tregs）抑制功能，导致猪蛔虫更低的宿主免疫逃逸，另外，我们将两种蛔虫抗原分别加入到体外培养的C57小鼠脾脏淋巴细胞中发现人蛔虫提取物具有促进Foxp3表达的能力，而猪蛔虫提取物此反应不及前者。这个结论与我们前期动物实验即：分别感染了人蛔虫和猪蛔虫蛔虫动物模型（C57小鼠）检虫率不同是相吻合的，见（Ascaris: Development of selected genotypes in mice. Experimental Parasitology 131 (2012) 69–74第二作者 SCI)。因此人蛔虫和猪蛔虫蛔虫所诱发的不同免疫反应可能是导致宿主捡虫率不同的重要原因。这些研究进一步阐明了人蛔虫及猪蛔虫具有不同的免疫机制，为进一步探讨蛔虫的免疫机制以及人型蛔虫、猪型蛔虫是否人畜共患疾病积累了资料，填补了寄生虫免疫的一项空白。