ABCE1基因与肺癌侵袭转移的相关性及功能的研究

前期研究中，在手术切除的小细胞肺癌转移淋巴结中筛选出1个与转移表型相关的基因ABCE1（ATP-binding cassette E1），并证实该基因在正常肺组织中几乎不表达，而在肺淋巴结转移癌中呈异常高表达，推测它可能是一个新的转移相关基因。经联网检索，目前罕见ABCE1与肿瘤的侵袭及转移相关的报道。本立项拟在构建稳定过度表达/封闭ABCE1基因的肺癌细胞株的基础上，通过体外细胞生物学的细胞分离与粘附实验、迁移与侵袭实验，体内动物成瘤及转移实验证实该基因与肺癌转移的相关性。进一步应用蛋白质相互作用的方法筛选出与ABCE1相互作用的蛋白质并分析其功能,初探ABCE1基因在转移机制中的作用。探讨ABCE1基因在侵袭和转移中的功能及作用，可为阐明恶性肿瘤转移的发生机制提供理论依据，为恶性肿瘤的临床诊断和治疗提供有效的靶向基因或外源基因，具有十分重要的科学意义和潜在的临床应用价值。

申请者在前期国家自然科学基因课题的研究中，应用mRNA 差异显示技术及激光俘获显微切割技术（Laser Capture Microdissection，LCM），在手术切除的小细胞肺癌及其淋巴结转移癌标本中筛选和克隆出与肺癌转移表型相关的1个基因。将该基因克隆、测序后，发现该基因片段与位于人类4号染色体4q31上的已知基因ABCE1（ATP-binding cassette E1）基因高度同源。为此，我们应用DNA末端快速扩增（RACE）技术，在NCI-H446人小细胞肺癌细胞株和NCI-H292肺淋巴结转移癌细胞株中，分别扩增出该基因片段的全长未知基因序列，结果显示其全长序列与GenBank中发表的ABCE1基因序列完全一致，证实该基因既是已知的ABCE1基因。.经文献检索，当时ABCE1在与肿瘤的发生发展及侵袭转移方面的报道甚为少见。因此我们在本立项研究中对ABCE1基因与肺癌的相关性进行了研究。结果显示：免疫组织化学染色ABCE1表达主要定位于细胞浆内，60例非小细胞肺癌中ABCE1阳性表达率51.67%（31/60）。并应用RT-PCR，Western blot对48例肺腺癌及15例癌旁组织中ABCE1的表达情况进行了检测。结果显示：在肺癌及癌旁肺组织中ABCE1 mRNA及蛋白均有表达，肺腺癌组织中ABCE1的高表达有显著差异（P<0.001）。在此基础上我们更进一步应用RNAi干扰技术对ABCE1基因高表达的NCI-H446小细胞肺癌细胞株构建稳定传代的沉默ABCE1基因的细胞株，进行体外细胞生物学的细胞分离实验、划痕修复试验、细胞粘附实验和迁移与侵袭试验。结果证实ABCE1基因的下调使肺癌细胞的迁移与侵袭能力明显下降。我们的最新研究结果显示：应用基因芯片检测法在肺腺癌细胞中，伴随着ABCE1基因下调的同时，很多的肺癌相关基因的表达随之发生变化。.以上的前期研究结果提示ABCE1与肺癌的发生发展及转移过程有着密切的相关性，更进一步提示ABCE1基因是一个参与肺癌转移的相关基因。